Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 34

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 28 29 30 31 32 33 < 34 > 35 36 37 38 39 40 .. 100 >> Следующая

в случае поверхностного антигена гепатита В (Wei et al., 1977). Можно ожидать, что в будущем неизотопные метки получат широкое применение при диагностике инфекционных заболеваний.
3.8.3. Свободнорадикальные метки
Свободный радикал, т. е. молекула, которая содержит неспаренный электрон, обладает магнитным моментом, который можно легко измерить с помощью спектрометра электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Описан иммунологический метод определения морфина, в котором в качестве меченого лиганда используется морфин, связанный с нитроксидным радикалом, который играет роль спиновой метки (Leute et al., 1972). При связывании со специфическим антителом свободный радикал иммобилизуется, что вызывает значительное изменение спектра ЭПР. Таким образом, для измерения связанного и свободного меченых лигандов можно обойтись без их разделения. Система, основанная на использовании свободнорадикальной метки, обладает всеми преимуществами других, описанных выше систем, в которых используются неизотопные метки и в которых нет необходимости отделять свободный лиганд от связанного. К недостаткам метода, использующего свободнорадикальную метку, в его современном виде можно отнести сравнительно низкую его чувствительность, что позволяет использовать этот метод только для анализа тех веществ, которые содержатся в крови в высоких концентрациях.
3.8.4. Возможность использования бактериофага в качестве меткн
Бактериофаг, присоединенный к антигену, инактивируется при образовании комплекса антигена с антителом (Andrleu et al., 1975). Поэтому о распределении метки между свободным и связанным антигеном, к которому предварительно присоединен бактериофаг, можно судить по инфекционности свободной фазы.
УСЛОВИЕ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДА СВЯЗЫВАНИЯ— НАЛИЧИЕ СВЯЗЫВАЮЩЕГО АГЕНТА
Характеристики радиоиммунологического и других, родственных ему методов анализа зависят прежде всего от природы связывающего агента. Другие факторы, такие, как, например, меченый лиганд или способ разделения свободного и связанного лиганда, являются в известном смысле BTopocte-пенными: ими можно манипулировать, подбирая оптимальные варианты, тогда как природу связывающего агента изменить, как правило, нельзя.
Наиболее широко из доступных связывающих агентов используются специфические антитела, которые в сочетании с изотопной меткой применяются в радиоиммунологическом методе анализа. Менее широко применяются, хотя и не утратили еще важного значения, методы анализа, в которых используются связывающие белки плазмы (называемые обычно методами конкурентного связывания с белками) или клеточные рецепторы (рецепторный анализ). Наконец, существует небольшая группа методов, которые известны значительно меньше и которые не принято считать методами связывания, хотя в них применяется тот же главный принцип, а именно система связывающий агент — лиганд. Примером может служить метод, в котором в качестве связывающего агента по отношению к субстрату используется фермент при условии, что существует метод количественного определения субстрата.
4.1. Необходимые характеристики связывающего агента
Существует три основных критерия, которым должен отвечать связывающий агент: сродство, специфичность и доступность.
Важное значение сродства уже отмечалось (см. разд. 1.7) и в дальнейшем (см. разд. 8.22) будет рассмотрено более детально. Чувствительность метода (минимальное количество
лиганда, которое может быть определено), за редкими исключениями, зависит от сродства (или величины К) связывающего агента. Этот вывод непосредственно следует из закона действующих масс: для измерения данной концентрации немеченого лиганда необходимы сравнимые или более низкие концентрации связывающего агента и меченого лиганда. Если анализируемое вещество присутствует в низких концентрациях, то концентрации связывающего агента и меченого лиганда должны быть соответственно низкими, а для того, чтобы реакция шла при таких низких концентрациях, величина К должна быть высокой.
Вопрос о специфичности детально обсуждается в гл. 9. Очевидно, что связывающий агент должен быть по возможности специфичен только по отношению к анализируемому лиганду и неспецифичен по отношению к большому числу различных сходных веществ. Важное значение специфичности можно проиллюстрировать на следующих примерах. Существует ряд материалов (активированный уголь, фуллерова земля, стеклянные бусины), которые способны адсорбировать вещества биологического происхождения, в связи с чем они используются в методах экстракции и разделения. Для адсорбции на этих материалах характерно высокое сродство, поэтому в сочетании с меченым лигандом адсорбент подобного типа в принципе мог бы быть использован при соответствующем разбавлении в качестве эффективного связывающего агента. Однако адсорбенты с этой целью практически не используются, поскольку в этом случае метод хотя и обладал бы высокой чувствительностью, но был бы полностью лишен специфичности и его нельзя было бы использовать для анализа биологических жидкостей. Специфичность следует рассматривать не только по отношению к разным молекулам, но и по отношению к различным участкам одной и той же молекулы. Так, связывающие агенты, используемые в радиоимму-нологическом и радиорецепторном методах анализа, могут «узнавать» разные участки в одних и тех же молекулах. При анализе интактных молекул этот факт не имеет большого значения, однако он может приводить к существенному расхождению результатов, если в процессе метаболизма образуются молекулярные фрагменты, имеющие различную скорость клиренса, что, очевидно, имеет место в биологических системах in vivo (см. разд. 11.4).
Предыдущая << 1 .. 28 29 30 31 32 33 < 34 > 35 36 37 38 39 40 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed