Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
Задача настоящей монографии состоит в изложении основ радиоиммунологического и родственных ему методов с таким расчетом, чтобы помочь тем, кто впервые сталкивается с этой проблемой, а также тем, кто уже имеет некоторый опыт практической работы, но стремится расширить свои знания по проблеме в целом. Монография не является исчерпывающим обзором, который почти невозможно написать в настоящее время
из-за очень большого количества материала и быстрого развития данной области. По этим же причинам читатель не найдет в монографии детального описания отдельных методов. Вместо этого в ней сделана попытка рассмотреть вопросы, которые являются общими для любых исследований с применением радиоиммунологического метода, независимо от того, идет ли речь о подготовке материалов и их использовании или об интерпретации результатов. Конкретные примеры, которые встречаются в монографии, приведены только с целью иллюстрации общих положений, но не для описания частных случаев.
1.2. Терминология
»
С самого начала необходимо пояснить некоторые термины, которые будут часто встречаться в тексте. Во всех рассмотренных в книге методах используется комбинация двух веществ, одно из которых называют связывающим агентом, а другое (количество которого измеряют) —лигандом. Использование этих неспецифических названий подчеркивает то обстоятельство, что радиоиммунологический метод является лишь одним из серии сходных по своей идее методов, хотя в настоящее время он и пользуется наибольшей известностью и популярностью. Для обозначения всей группы методов больше всего подходит название «методы связывания»; под это определение подходит любой метод, в котором количественное определение какого-то вещества основано на постепенном насыщении специфического для этого метода связывающего агента этим веществом и последующем измерении его распределения между «свободной» и «связанной» фазами. Таким образом, процесс связывания является тем общим принципом, на котором основаны все методы данной группы. Существенно при этом, что природа связывающего агента и способ разделения свободной и связанной фаз могут быть разными (табл. 1.1). Наиболее широко распространена классификация методов связывания, учитывающая природу используемого связывающего агента. В иммунологическом методе в качестве связывающего агента используются антитела, в методе конкурентного связывания — связывающие белки плазмы, в рецепторном методе — природные клеточные рецепторы. Для определения соотношения между количествами свободного и связанного лиганда обычно проводят разделение свободной и связанной фаз при помощи физико-химических методов и судят о распределении по относительному содержанию в каждой из фаз «метки», представляющей собой очень доалые количества лиганда, меченного радиоактивным цзотс^-
Таблица 1.1
Место радиоиммунологического метода и родственных ему методов среди аналитических методов, используемых при определении веществ биологического происхождения
Существует три основных вида методов анализа: биологические, физико-химические и методы связывания. Методы связывания могут предназначаться для измерения как связывающих агентов, так и лигандов. Для определения лиганда можно использовать связывающие агенты трех различных типов, каждый из которых в принципе можно применять в сочетании с одним из указанных ииже видов метки. При любом сочетании перечисленных компонентов на последнем этапе должно быть проведено разделение свободного и связанного лиганда, хотя в некоторых случаях такого разделения может и не потребоваться.
Методы определения веществ биологического происхождения
Биологические
методы
Методы
связывания
Физико-химические
методы
I
Методы определения сиязывающего агента
Антитело
Связыиающий белок плазмы
Методы определения лиганда
I
Клеточные "> Тип рецепторы } связывающего агента
Нет метки Изотоп Фермент Флуоресцирующее Фаг ЧастицаТипы
вещество } метки
Разделение свободного и свизанного лиганда
Разделение не проводится
Разделение связанной и свободной формы связывающего агента•
Способы
разделения
пом. Следует, однако, отметить, что ни одна из перечисленных черт не является обязательной в методе связывания. Так, меченым может быть не лиганд, а связывающий агент, как это имеет место в иммунорадиометрическом методе. Меткой не обязательно должен служить радиоактивный изотоп; в качестве метки мо>кно использовать любое вещество, которое может быть измерено в очень малых количествах, например флуоресцирующее соединение (флуороиммунологический метод) или фермент (энзимоиммунологический метод). Наконец, в ряде случаев свободную фазу не обязательно отделять от связанной: в тех случаях, когда характеристики метки в свободной и в связанной фазах различаются достаточно сильно, разделение является необязательным.
