Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
Во многих лабораториях, в которых методы связывания используются в больших масштабах, в качестве рабочих стандартов применяют собственные препараты, которые время от времени калибруют по соответствующим международным стандартам. Такой метод широко применяется при производстве предназначенных для продажи наборов для радиоимму-иологического анализа (так называемых китов — kits), поскольку стандарты Всемирной организации здравоохранения недоступны для использования в коммерческих целях. Против использования рабочих стандартов в принципе ничего нельзя возразить (при условии, что оии хорошо откалиброваны по международным стандартам), однако всегда следует иметь в виду, что используемое вещество может все же оказаться иеидентичным международному стандарту. Оно может, например, быть менее стабильным, причем это обстоятельство может остаться незамеченным, если не проводить строгой проверки. С другой стороны, может случиться так, что рабочий стандарт превосходит международный стандарт, особенно по своей физико-химической гомогенности. Так, например, с помощью международного стандарта нельзя было бы продемонстрировать специфичность радиоиммунологического метода для количественного определения окситоцииа и вазо-прессина, поскольку международный стандарт представляет собой смесь обоих этих гормонов. Трудности возникают также
Таблица 2.1
Приготовление стандартных растворов
Приготовление стандартных растворов в методах связывания является, пожалуй, одним из наиболее важных этапов, от которого в большой степени зависит качество результатов (см. также разд. 10.2.1.4). Готовить стнадартные растворы обязательно должны опытные, заслуживающие доверия лаборанты, используя при этом наиболее точные весы и калиброванную мерную посуду.
При проведении анализов, имеющих важное клиническое значение, не следует готовить стандартные растворы путем серийных разведений. Более точными являются стандартные растворы, приготовленные отдельными разбавлениями; ниже приведена схема приготовления таких растворов иа примере ПЛЧ:
1. Взвешивают 10 мг высокоочищенного ПЛЧ (ICN Pharmaceuticals)
2. Растворяют ПЛЧ в 10 мл сыворотки, не содержащей ПЛЧ (сыворотка неберемениых женщин или животных)
3. Делят раствор на аликвоты, по 0,5 мл каждая, и хранят в закрытых пробирках при глубоком замораживании
4* Размораживают одну аликвоту раствора ПЛЧ и тщательно перемешивают раствор; содержимое пробирки разбавляют в 10 раз (0,4 мл раствора ПЛЧ + 3,6 мл сыворотки, не содержащей ПЛЧ) и получают раствор, содержащий 100 мгк ПЛЧ в 1,0 мл
5. В 6 пробирок наливают по 10 мл сыворотки, свободной от ПЛЧ
6. Отбирают из каждой пробирки определенный объем раствора и заменяют его таким же объемом раствора ПЛЧ, приготовленного так, как это описано в п. 4
Nt пробирки Заменяемый объем, мл Концентрация стандарта,
мкг/мл
1 1,2 12
2 0,8 8
8 0,6 6
4 0,4 4
5 0,2 2
в 0,1 1
Содержимое пробирок делят на аликвоты (по 0,2—0,4 мл), каждой из которых должно хватить для работы в течение одной недели; пробирки закрывает, растворы замораживают и хранят замороженными (см. разд. 2.6)
Замечаниям 1) для того чтобы гарантировать максимальную точность и достоверность, следует взвешивать сравнительно большие количества стандарта, используя для этой цели мнкрограммовые весы; 2) алнквоты стандартных растворов должны быть достаточно большими, чтобы их хватило по меньшей мере иа ! год работы; 3) каждое разбавление стандарта следует производить отдельно, чтобы избежать суммирования ошйбок, связанных с разбавлением.
Трудно дать какие-то общие рекомендации относительно набора стандартных растворов; часто бывает удобно, чтобы такой набор был приготовлен по принципу математической прогрессии, однако это удобство носит чисто практический характер и никак не свяаано с логикой самого метода анализа. По этому вопросу можно еде* лать три замечания общего порядка: 1) стандартные растворы не следует готовить так, чтобы разница между двумя соседними точками на калибровочной кривой была слишком малой (для большинства обычных анализов эта разница не должна быть меньше 4-5%); *) С Практической точки зрения удобно в качестве стандарта использовать раствор, ^иц^итрацня которого лежала бы иа границе нормы (например, в случае днгоксниа — -.5 вг/мл); 3) указанная в п. 2 концентрация стандарта никогда не должна прихо» иа веР*иий или нижний участок калибровочной кривой.
в тех случаях, когда рабочий стандарт дает калибровочную кривую, которая идет непараллельно кривой, полученной для международного стандарта, что делает трудным и даже невозможным количественное сравнение. С подобной ситуацией приходится сталкиваться, например, в тех случаях, когда при анализе содержания ЛГ в крови используют высокоочищен-ный гипофизарный ЛГ, а затем сравнивают результаты с Данными, полученными для международного стандарта (2nd IRP/HMG), представляющего собой гормон, выделенный из мочи.
