Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
иг/мл
Рис. 2.2, Калибровочные кривые для фибриногена и продуктов его распада—фрагментов D (FgD) и Е (FgE). полученные при использовании в качестве меченых лигандов [1?Ч] FgH, и антисыворотки к FgD. Обратите внимание на то, что в этом анализе фибриноген дает лишь частичную перекрестную реакцию» хотя по идее ои должен содержать ту же последовательность аминокислот, которая характерна для FgD. (Данные любезно предоставлены д-ром Я- Б. Гордоном.)
\
радиоиммунологическом определении продукта его распада — FgD (рис. 2.2) (Gordon et al., 1973). При радиоиммунологическом анализе гормона его метаболиты могут давать положительные результаты, вследствие чего создается неправильное представление о биологической активности (см. разд. 11.4). Конъюгаты стероидов слабо или совсем не реагируют с антисывороткой к неконъюгированным стероидам и в большинстве случаев не определяются методами, предназначенными для определения последних.
2.5. Стандарты
Различные лаборатории, применяющие один и тот же метод анализа, используют тем не менее разные связывающие агенты, меченые лиганды и методические приемы; эти различия неизоежно должны приводить к большим расхождениям в результатах анализа одного и того же материала. Один из путей решения этой проблемы — использование единых стандартов, в связи с чем много усилий было направлено на то, чтобы обеспечить ими все лаборатории. В настоящее время производство и распространение единых стандартов находится под контролем Всемирной организации здравоохранения и осуществляется в Национальном институте биологических стандартов и контрольных препаратов при Комитете по медицинским исследованиям в Англии и в Национальном агентстве по гормонам гипофиза при Национальном институте ревматизма и патологии обмена и пищеварения в США.
Цель стандартизации на основе использования международных стандартов — дать единую форму выражения результатов, позволяющую сравнивать данные, получаемые в разных лабораториях или в одной и той же лаборатории в разное время. Материал, принятый в качестве стандарта, должен удовлетворять следующим требованиям (Bangham, Cotes, 1974): 1) он должен быть доступен в количестве, достаточном для того, чтобы им можно было снабжать большое число лабораторий в течение многих лет; 2) он должен быть стабильным, причем должно быть известно, какое влияние оказывает на него хранение в течение нескольких месяцев при разных температурах; 3) он не должен содержать примесей, мешающих определению, в связи с чем перед распространением он должен быть протестирован иа большом числе различных аналитических систем; 4) в идеальном варианте он должен представлять собой индивидуальное вещество высокой степени чистоты (т. е. состоять из молекул только одного вида); следует, однако, отметить, что это требование в ряде случаев по указанным выше причинам не может быть реализовано (см. разд. 2.3).
Стандарты готовят обычно путем распределения большого количества раствора требуемого вещества по нескольким сотням ампул одинакового размера, изготовленных из нейтрального стекла; полученные таким путем стандарты замораживают и хранят при низкой температуре. Альтернативный способ заключается в том, что все ампулы с раствором одной партии подвергают лиофилизации и запаивают в токе азота. Второй способ удобен тем, что позволяет рассылать стандарты по почте, тогда как материал, находящийся в растворе, следует хранить замороженным вплоть до момента использования. Недостаток лиофильно высушенных препаратов состоит, однако, в том, что они могут подвергаться значительным изменениям.
Существует общее правило, согласно которому результаты анализа при пользовании широко распространенным стандартом следует выражать в единицах, принятых для этого стандарта, а не в произвольно.выбранных единицах. Это правило, однако, часто нарушают. Так, например, международный стандарт человеческого ЛГ (т. е. MRC 68/40) рассылается в ампулах, содержимое которых выражено в условных единицах; связано это с тем, что'содержащийся в ампулах материал физико-химически точно не охарактеризован. Вместе с тем при использовании этого стандарта исследователи нередко выражают результаты анализа в абсолютных весовых единицах, используя переходный коэффициент, рассчитанный исходя из биологической активности, приходящейся на единицу веса высокоочищенного препарата ЛГ. Подобный способ
расчета таит в себе две опасности: во-первых, биологическая активность стандарта не всегда точно известна, поскольку при тестировании иа различных системах получаются разные результаты; и, во-вторых, биологическая активность существующих высокоочищенных препаратов ЛГ также не всегда является однозначной. Таким образом, перевод в весовые единицы создает ошибочное впечатление точности, не подтверждаемое реальными фактами. Противоположная ситуация наблюдается в случае небольших пептидных гормонов, таких, как окситоцин и вазопрессин. Практически во всех случаях при налаживании и последующем применении радиоиммунологических методов анализа этих гормонов в качестве стандартов используются имеющиеся в продаже чистые синтетические препараты. Очевидно, что количество таких веществ всегда можно точно выразить в весовых единицах, но тем не меиее авторы, как правило, представляют полученные ими результаты в единицах биологической активности. Делается это для того, чтобы легче было сравнивать новые данные с более ранними результатами, полученными биологическими методами анализа. Такой Перевод хотя и не совсем логичен, но вполне правомерен, поскольку перевод весовых единиц в единицы биологической активности в принципе не вызывает возражений.
