Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
2.3.3. Стероидные гермены и локаротвенные препараты
Большинство соединений этого типа может быть получено химическим путем. Они производятся для продажи коммерческими фирмами и, согласно указаниям фирм, характеризуют-
ся обычно 100%-ной чистотой. Однако этой маркировке не всегда следует доверять и в каждой лаборатории при налаживании нового метода анализа необходимо проверять чистоту основных реагентов, используя для этого такие методы, как, например, тонкослойная или газожидкостная хроматография или масс-спектрометрия. Среди веществ этого типа заметное исключение с точки зрения чистоты составляет антибиотик гентамицин. Во время лечения этим антибиотиком клиницисту важно знать его содержание в крови, а между тем применяемый препарат содержит несколько компонентов. Этот факт свидетельствует о том, как осторожно следует относиться к клиническим данным, получаемым с помощью нового метода связывания.
2.3.4. Небельшие иептидные гермоны
Наиболее известные небольшие пептидные гормоны, такие, как, например, окситоцин, аргинин-вазопрессин, ангиотензин, ЛГ/ФСГ-освобождающий гормон, ТТГ-освобождающий гормон, могут быть получены синтетическим путем и обладают высокой степенью чистоты. Для тех лабораторий, которые не могут синтезировать этн гормоны самостоятельно (а таких лабораторий большинство), доступность последних зависит обычно от того, насколько они широко используются в качестве лечебных препаратов. Так, например, синтетический окситоцин, широко применяемый для стимуляции родов, свободно доступен в миллиграммовых количествах. В то же время аргинин-вазопрессин (АВП), являющийся антидиуретнческим гормоном у большинства видов млекопитающих, купить до» вольно трудно. Для клинических целей производится его аналог— лизин-вазопрессин (ЛВП). Этот аналог легко доступен, но по своим иммунохимическим свойствам он может значительно отличаться от АВП и, следовательно, может оказаться непригодным для анализа эндогенного гормона у людей.
Так же как и в случае стероидов н лекарственных препаратов, нельзя быть уверенным в том, что синтетические пептиды всегда обладают 100%-ной чистотой. В процессе их синтеза вполне могут образовываться «ошибочные» пептиды и, кроме того, могут оставаться свободные аминокислоты. Чистота конечного продукта зависит от того, насколько тщательно из него удаляются эти примесн. Более того, в процессе хранения синтетические пептиды могут подвергаться различным изменениям; может происходить, в частности, их окисление и образование димеров. Поэтому перед использованием всех препаратов подобного типа желательно проверять их физикохимические свойства (например, при помощи тонкослойно^ хроматографии) и биологическую активность,
2.4. Различие между очищенным и эндогенным лигандом
В идеальном случае лиганд, используемый в методе связывания (в качестве меченого препарата или стандарта), должен быть идентичен анализируемому эндогенному лиганду. Однако уже из предыдущего обсуждения должно быть ясно, что такой идеальный вариант не всегда имеет место. Отсутствие идентичности между очищенным и эндогенным лигандом может быть связано как с отличием исходного лиганда от анализируемого, так и с изменением лиганда в процессе . анализа.
Имеется большое число причин, лежащих в основе таких различий. Укажем на ряд из них.
1) Видовые различия. В прошлом при радиоиммунологическом анализе гормонов человека использовали, как правило, гормоны животных. Так, например,, при количественном определении инсулина и паратиреоидного гормона использовали гормоны быка.
2) Различия между отдельными линиями. Существует не- -сколько типов антигена гепатита В; все они содержат общую детерминанту, обозначаемую а, и по одной от каждой из двух пар взаимоисключающих детерминант, одна из которых d и у,
а вторая w и г (Le Bouvier, 1972).
3) Тканевые различия. Вид ткани или жидкости, из которой получен антиген, может иметь исключительно важное значение. Глюкагон, выделенный из кишечника, иммунохимически отличается от глюкагона поджелудочной железы (Bloom, 1974). Пептиды, выделяемые «АКТГ-секретирующими» опухолями, могут сильно отличаться от нормального АК.ТГ гипофиза (Rees, 1976). Гипофизарные гликопротеиды (ЛГ, ФСГ и ТТГ), выделенные из мочи, отличаются по своим иммунологическим свойствам от соответствующих гормонов, выделенных из экстрактов гипофиза (Franchimont, 1971).
4) Множественные формы лиганда. Известно немало случаев, когда эндогенный лиганд может существовать в нескольких формах. Инсулин синтезируется в организме в виде одной большой молекулы-предшественника, так называемого проинсулина; к моменту секреции эта молекула расщепляется с образованием двух полипептидных цепей инсулина и связывающего участка пептидной цепи, или С-пептида (Steiner et al., 1968). В определенных условиях проинсулин секрети-руется в кровь, однако он не может быть обнаружен с помощью большинства методов, предназначенных для определения инсулина. Отсутствие идентичности может быть также связано с метаболизмом эндогенного материала: например, фибриноген дает лишь частичную перекрестную реакцию при
