Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре - Бухало А.С.
ISBN 5-12-000267-6
Скачать (прямая ссылка):
В глубинной культуре в течение первых 48 сут отмечены однотипный по морфологии рост культуры, наличие пряжек на мицелии. В этот период в культуральной жидкости наблюдаются как мелкие (диаметром 1—2 мм), плотные, пушистые шарики, так и более крупные (диаметром до 5 мм), гладкие, полые внутри (табл. XXXI), а также отдельные гифы.
Урожай биомассы, в первые 55 сут составил 0,5—1,5 г/л/сут по сухой массе. После 55 сут отмечено увеличение среднесуточной продукции биомассы, которое достоверно больше на 62-е сутки культивирования, достигая 2,4 г/л. В то же время происходят изменения в морфологии культуры. Образуются очень крупные (диаметром до 1 см) колонии, от которых отходят толстые, легко отделяющиеся пучки гиф, создающие новые центры роста (табл. XXXI). Так как пересев таких крупных колоний нельзя было осуществить с помощью пипетки, культура стерильно гомогенизировалась в дезинтеграторе при 6 тыс. об/мин. После гомогенизации рост происходил в виде сходных по размеру гладких шариков, при этом сохранялся высокий среднесуточный урожай биомассы (1,8 г/л). На 76—83-е сутки в культуральной жидкости появляется много коротких разветвленных гиф, лишенных пряжек. В этот период отмечено падение биомассы до 0,7—0,8 г/л/сут. К 90-м суткам культивирования такие гифы наблюдаются в значительном количестве. В это же время отмечено образование многочисленных рыхлых агломератов и мелких, плотных, пушистых шариков, что сопровождается увеличением среднесуточной биомассы до 1,8—2,0 г/л. Такой урожай биомассы меньше, чем на 62-е сутки, но больше, чем в первые 48 сут культивирования. Значение pH среды и содержание РВ в конце 7-суточцой. ферментации сохраняется практически постоянным на протяжении всего опыта. Повышение pH до 6,2 и снижение РВ до 2,1 совпадает с пиком биомассы на 63-е сутки культивирования. Величины среднесуточного урожая биомассы за весь период культивирования достоверно различаются (р > 0,95).
Суспензия дисперсно растущих) коротких гиф, лишенных пряжек, была иноку -лирована на агаровые косяки, которые инкубировались в течение 7 сут в термостате, затем этой культурой были инокулированы колбы с жидким суслом, которые инкубировались в термостате. В пленке 7-суточного поверхностного мицелия наблюдались пряжки. Этим мицелием, предварительно гомогенизированным, были инокулированы колбы и проведЬно глубинное культивирование на качалке. Среднесуточный урожай биомассы при этом составил 1,2 г/л, пряжки сохранялись.
Кривые роста колоний (рте. 17), инокулированных поверхностным и глубинным мицелием, почти совпадают. Они имеют волнообразный характер, что свидетельствует о наличии определенных биоритмов, характерных для роста P.tigrinus 131. Показательно, что точки, в которых отмечены наиболее низкие и наиболее высокие значения диаметра колоний, совпадают по времени с точками падения и пиками биомассы в глубинной культуре. При глубинном культивировании в это время отмечалось появление дисперсного роста в виде коротких разветвленных гиф, в поверхностной культуре при посеве глубинным мицелием — секторность колоний (табл. XXXI).
При микроскопическом исследовании культурального мицелия на агаризованной среде в культурах, инокулированных глубинным мицелием, отмечено появление очень крупных пряжек (длина до 15 мкм; высота до 10 мкм), расположенных на гифах толщиной 3—5 мкм. о
Врет культи&ироЬания, сут
Рост Panus tigrinus 131 при многократных пассажах: 1 - глубинная культура; 2 - поверхностная культура, инокуляция поверхностным мицелием; 3 — поверхностная культура, инокуляция глубинным мицелием
В пробирках и чаппсах Петри, иноку лированных как поверхностным, так и глубинным мицелием, на рассеянном свету появляются плодовые тела, дифференцированные на ножку и шляпку. Обычно наблюдается или незначительное количество более крупных плодовых тел,или много более мелких (табл. XXXI). Плодоношению, как правило, предшествует образование на поверхности мицелиальной колонии коричневой плотной корки, придающей ей кожистый характер. Часто плодовые тела начинают формироваться в месте инокуляции глубинным мицелием, при этом плодоношения появляются несколько раньше, чем при пассажах поверхностной культуры. В пробирках, непосредственно инокулированных дисперсным мицелием, лишенным пряжек, плодообразование не происходит. Однако если посп&-дассажей в поверхностной и глубинной культуре снова образуются пряжки, то при инокуляции таким мицелием появляются нормальные плодовые тела.
На поверхности колоний, растущих на агаризованной среде, проводили капельные цветовые реакции на наличие лакказы, тирозиназы, пероксидазы. Реакция на эти тесты была положительной во всех вариантах опытов на протяжении периода культивирования.
Следовательно, при длительном поверхностном и глубинном культивировании P.tigrinus 131, сопровождавшимся многократными пассажами культуры, покатано, что на агаризованной я жидкой питательных средах наблюдаются ритмичные колебания роста, выражающиеся в изменении среднесуточного прироста биомассы и диаметра колоний. При однофакторном дисперсионном анализе всех выборок в каждом варианте опыта установлено, что величины, характеризующие среднесуточную продукцию биомассы и среднесуточный прирост диаметра колонии иа протяжении периода культивирования, достоверно различаются. Периоды более и менее активного роста продолжительностью 15—17 сут совпадают по времени в глу-бинной и поверхностной культурах, что свидетельствует о ритмиадости роста, которая присуща данному виду.
