Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре - Бухало А.С.
ISBN 5-12-000267-6
Скачать (прямая ссылка):
При выделении культур часто происходит загрязнение другими мицелиальны-ми грибами, среди которых обычно встречаются представители родов Penicillium, Aspergillus, Fusarium, Trichoderma, Chaetomium, Mucor и др. Избавиться от грибного загрязнения в ряде случаев не удавалось даже при многократных пассажах. Нами и в работах некоторых авторов (Watling, 1971; Hale, Savory, 1976) показано, что дереворазрушающие базидиомицеты могут использовать некоторые фенольные соединения, токсичные как для бактерий, так и для других грибов. При выделении культур высших базидиомицетов как эффективное средство, ингибирующее рост некоторых гифомнцетов-контаминантов, могут бьггь использованы фунгипиды — беномия и фундозол. На сусло-агаре с добавлением разного количества они оказывают на грибы различное действие. Беномил, фундазол не ингибируют Marasmius alliaceus, Crinipellis chevczenkovi. Рост Pleurotus ostreatus и Flammulina velutipes при внесении как беномила, так и фундазола в количестве 10—25 мг/л не отличается от контроля и несколько замедляется при концентрации фунгицидов 50 мг/л. Более чувствительным к действию испытанных фунгицидов оказался Panus tigrinus, для которого хороший рост отмечен на среде с беноми-лом в концентрации 10 мг/л и слабый — 50 мг/л. Испытанные фунгициды полностью подавляют рост одного из наиболее быстрорастущих и часто встречающихся грибов-контаминантов Trichoderma lignorum. При концентрации 25—50 мг/л фундазола не росли также Aspergillus niger и Fusarium oxysporum. Беномил в меньшей мере, чем фундазол, ингибирует рост Aspergillus niger. Оба фунгицида не оказывают отрицательного воздействия на испытанный штамм Rhizopus nigricans.
Выделение из субстратов. Органы полового спороношения, т.е. плодовые тела, у высших съедобных базидиомицетов образуются, как правило, на протяжении непродолжительного периода их жизненного цикла. В природе эти грибы, кроме видов афиллофоральных грибов с многолетними плодовыми телами, существуют преимущественно в форме вегетативного мицелия, развивающегося в различных субстратах — почве, живой и мертвой древесине, растительных остатках, на корнях высших растений и тд. Споры высших базидиомицетов обнаруживаются в воздухе и воде (Инголд, 1957).
При изучении микофлоры почв с применением метода разведения обычно изолируются стерильные мицелиальные формы. Только незначительное количество изолированных таким методом культур из почв рисовых полей можно отнести
к базидиомицетам (Бухало, 1984). Из исследованных нами 190 культур erepWib-ных мицелиалькых форм, выделенных кз почв, лишь 12 были отнесены к базидиомицетам по наличию пряжек на мицелии. Дж.Воркап (Warcup, 1959) использовал метод непосредственного изолирования из почвы гиф и ризоморф базидиомицетов. Однако метод, который он применил, также не позволяет достаточно полно выделить виды высших базидиомицетов, обитающие в почве, и установить их видовую принадлежность. Из 170 культур грибов, выделенных Дж.Воркапом, 32 были отнесены им к базидиомицетам и только 6 из них были идентифицированы, до вида.
Для выделения культур высших базидиомицетов из живой и мертвой древесины, растительных остатков, лесной подстилки обычно используется метод накопительной культуры (Рипачек. 1967; Бухало, 19826). Кусочки субстрата, пронизанные грибницей, помещают на влажную стерильную фильтровальную бумагу в чашки Петри, изолируют развивающийся на субстрате воздушный мицелий.
В литературе достаточно полно описаны методы выделения культур микоризообразующих высших базидиомицетов из корней высших растений (Шемаханова, 1962; Мозер, 1963; Harley, Smith; 1983). Это трудоемкие методы. Они основаны на тщательной механической очистке к многократном отмывании корней растений. Их кусочки затем помещаются во влажную камеру или на различные питательные среды, которые обеспечивают рост мицелия грибов, образующих микоризу.
Можно констатировать, что практикуемое при специальных исследованиях изолирование культур высших базидиомицетов из субстратов из-за несовершенства методов выделения часто не дает возможности достаточно полно выявить и установить видовой состав грибов этой систематической группы, обитающих в исследующихся субстратах. Значительным препятствием при идентификации выделенных культур является то, что большинство мицелиальных изолятов не образуют плодовых тел.
Культуры хранили в холодильнике в пробирках с 20 см3 питательной среды, чтобы избежать высыхания. Проводился периодический пересев культур на агари-зоваяном пивном сусле (pH 4.5—5,0 и 7,0; сахаристость 8° поБаллингу) один раз в 10—11 месяцев. Культуры некоторых видов болетальных сохраняли наагаризо-ванном пивном сусле с добавлением отвара дубовой коры.
Рост многих культур на картофельно-глюкозной среде, особенно на морковном и хлебном агаре, которые испытывали в начале наших исследований как возможные среды для хранения музейных культур, как правило, был хуже, а некоторые культуры на этих средах погибали. При пересеве культур проводили их микробиологический контроль.
