Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре - Бухало А.С.
ISBN 5-12-000267-6
Скачать (прямая ссылка):
Когда культуры высших базидиомицетов выделяли из субстратов (почвы, древесины, растений), их образцы, пронизанные мицелием, помещали в стерильные бумажные пакеты, пробирки или чашки Петри и хранили в холодильнике при температуре 4—10 °С обычно несколько суток. Почвенные образцы отбирали по общепринятой методике (Кириленко, 1982).
Выделение мицелиальных культур из плодовых тел. С поверхности шляпки и ножки плодового тела, предназначенного для выделения культуры, скальпелем удаляли прилипшие растительные остатки, частички почвы. Если плодовые тела
36 были не очень гигроскопичны, их быстро промывали сначала в проточной, а затем
в стерильной воде и сушили на чистой фильтровальной бумаге. Так обрабатывали молодые плодовые тела грибов родов Agaricus, Boletus, Tricholoma, Clitocybe, Leccinum, Paxillus, Tricholomopsis, Polyporus, Lycoperdon, Calvatia, Bovista, Scleroderma и других с аналогичным габитусом и консистенцией. Чтобы плодовые тела не напитались водой у более старых экземпляров, а также у слизистых карпо-форов видов родов Collybia, Laccaria, Marasmius, Oudemansiella и др., после механической очистки плодовое тело обтирали горящей ватой, предварительно обильно смоченной этиловым спиртом, или обжигали его над пламенем горелки.
Подготовленное одним из описанных выше способов плодовое тело помещали вблизи горелки, разламывали. Кусочек ткани из внутренней части, не соприкасающейся с поверхностными участками, стерильным скальпелем или копьем переносили в чашку Петри на фильтровальную бумагу или хорошо застывшую поверхность агаризованной питательной среды. Размер тканевого инокулята достаточно большой: 0,3-1,5 см в диаметре. Если плодовое тело слишком маленькое и из него невозможно извлечь стерильную ткань, его быстро обжигали над пламенем горелки, а затем нарезали ножницами или пинцетом прямо над открытой чашкой Петри с питательной средой. Такой метод выделения исполь^оваЙи для получения культур видов родов Marasmius и Laccaria. ,
Студенистые плодовые тела Hirneola auricula-judae с неровной и обычно инфицированной поверхностью протирали спиртом и мелко нарезали. Однако сильное загрязнение, как правило, препятствовало успешному выделению культуры этого гриба,
У грибов с крупными плодовыми телами, мясистой ножкой и шляпкой изоля-ты брали из разных мест: шляпки, ножки, места перехода шляпки в ножку, гиме-нофора. Наиболее успешно изоляция происходила у грибов с достаточно толстой ножкой, например Boletus edulis и некоторых других болетальных, если для инокулята брали крупные кусочки ткани из основания ножки.
Хорошие результаты получены нами при выделении культур из гименофора молодых плодовых тел видов родов Agaricus, Armillariella, Suillus, Pholiota. Coprinus, еще закрытых покрывалом. Из более зрелых плодовых тел, гименофор которых значительно инфицирован, инокулят выделяли только на границе гиме-ниального слоя и мякоти шляпки. Аналогично поступали с плодовыми телами, у которых гименофор закладывается открыто.
Для выделения в культуру Asterophora lycoperdoides использовали хламидоспоры, располагающиеся в виде толстого порошистого слоя на шляпке. Они прорастали в течение нескольких суток.
Мицелиальные культуры гастеромицетов родов Lycoperdon, Calvatia, Bovista. Scleroderma получали из молодых карпофоров, предварительно простерилизован-ных этиловым спиртом.
Культуры Phallus impudicus выделяли на стадии ’’яйца”, когда плодовое тело еще окружено слоем слизи и заключено в плотный перидий. Для инокулята использовали кусочки глебы или другой стерильной ткани. При выделении в культуру Cyathus striatus и C.olla инокулятом служили перидиоли из молодых плодовых тел с неразорванным перидием.
Существенных различий в морфологии колонии и скорости роста мицелия у изолятов из разных частей плодового тела не отмечено.
Выделение культур производили обычно на плотную среду: сусловый или кар-тофельно-глюкозный агар. Бели выделение шло плохо и мицелий не образовывал колонии вокруг инокулированной ткани, в состав среды добавляли дрожжевой автолизат, отвар дубовой коры или листьев растений (крапивы, клевера) в количестве 0,1—0,5 %, водные экстракты из плодовых тел грибов. Для предотвращения бактериального загрязнения культур использовали подкислейную среду (pH 4,0— 5,0) или среду с добавлением 100—200 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина.
Как только молодой мицелий начинал расти на поверхности агаризованной среды, его вместе с кусочком этой среды переносили в пробирку с питательным агаром для дальнейшего роста. При необходимости делали несколько пассажей на среде, содержащей антибиотики. При выделении из инфицированных карпофоров, использовали (Watling, 1971) метод перевернутого агара.
Если обрастание тканевого ииокулята происходило плохо, например у некоторых видов родов Boletus, Suillus, Russuk, Lactarius и других, то кусочек карпофо-ра помешали на несколько дней в чашку Петри на влажную фильтровальную бумагу, используя метоп накопительной культуры (Пидопличко, 1953). После того, как на поверхности тканевого изолята появлялся пушок растущих гиф, изолят переносили на питательную среду.
