Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре - Бухало А.С.
ISBN 5-12-000267-6
Скачать (прямая ссылка):
1.1.3. Выделение чистых культур
Важную роль в изучении высших базидиомицетов играет разработка методов выделения чистых культур, что дает возможность расширить крут исследуемых объектов и сделать доступными для всестороннего изучения грибы разных таксонов и экологических групп.
О.Брефельд (Brefeld, 1877, 1889) первым предложил метод выделения культур из плодовых тел и базидиоспор, использованный позже Б.Дуггаром (Duggar,
1901, 1905), Р.Фальком (Falck, 1902), Я.Фуксом (Fuchs, 1911), Л.Матрушо (Matruchot, 1912) и др.Объектами исследований этих авторов служили преимущественно подстилочные сапротрофы, копротрофы и лигнотрофы.
Метод выделения культур высших базидиомицетов из плодовых тел был впоследствии широко использован (Melin, 1922; Modess, 1941; Возняковская, 1951; Sobotka, 1954, 1955; Mikola, 1955; Hiromoto, 1961; Pantidou, 1961a, b, 1962, 1964a; Шемаханова, 1962; Мозер, 1963; Semerdzieva, 1965; Рипачек, 1967; Ниэ-ковская, 1969а; Частухин, Николаевская, 1953, 1969; Pantidou, Watling,
1970, 1973; Watling, 1971, 197.7; Pantidou et al., 1983). Отмечен хороший рост культур отдельных видов родоЦТ1^^пц^”|СоЦуЬ1ач Mycena, Clitocybe, 17
Melanoleuca. Lvophyiium. Naucoria. Hebeloma. Lepiota. Agaricus. Conocybe. Rhodo-naxiilus и других, выделенных из тканей карпофоров. В то же время указано, что в культуре не росли многие виды родов Inocybe, Russula. Boletus. Tricholoma, Rhodophvllus и Lactarius. Базидиомицеты лучше росли на натуральных средах, чем на синтетических. Ниже приведен состав некоторых агаризованных питательных сред, используемых для культивирования высших базидиомицетов.
Сусло-агар (Пидопличко, 195ЗУ: пивное сусло 8° по Баллингу — 1 л, агар — 20 г, pH среды 5,8.
Мяльц-агар (Stalpers. ]978): мальц-экстракт — 12,5 г, агар — 20 г, Н20 — 1 л.
Среда Норкранс (Norkrans, 1953) : пйокоза — 10 г, аммоний виннокислый — 1 г. КН2РО - 1 г. MgSCV 7Н2 О - 0,5 г, железо лимоннокислое — 5 мг, ZnS04 х х 7Н2О - 4.4 мг. MgS04 - 5 мг, СаС1: - 55,5 мг, витамин Bj — 40 мг, вода — 1 л.
Сусло-агар с отваром дубовой коры (Бухало, 1973а) : пивное сусло 4° по Баллингу - 1 л. агар — 20 г, отвар дубовой коры - 5 мл, pH среды 5 J5.
Глюкоэо-глютаминовый агар (Semerdzieva, Cejp, 1966): глюкоза — 20 г, глю-та^шновая кислота — 0,5 г, MgS04‘7H20 — 0,5 г, КН2РО4 — 1 г, FeC03 — 10 капель (1 %-ный раствор), тиамин — 200 мкг, Н20 — 1л, агар — 20 г, pH среды 5,5.
Агар с вишневым отваром (Stalpers, 1978) : отвар прокисших вишен — 200 г, агар — 20 г. Н2 О — 800 мл, pH среды 3,8—4,6.
Агар из проростков пшеницы ( Semerdzieva. Cejp, 1966): проростков пшеницы — 100 гЛ20 — 900 мл. агар — 15 г, pH среды 5,5. Проростки кипятятся с водой
15 мин, центрифугируются, объем доводится до первоначального.
Овсяный агар (Semerdzieva, Cejp, 1966) : овсяная мука — 30 г, Н20 — 970 мл, агар — 15 г, pH среды 5.8. Овсяная мука кипятится в воде 1 ч при-перемешивании, Фильтруется через фильтр Гаузе, доводится до объема 1 л.
Морковный агар (Semerdzieva. Cejp, 1966): экстракт моркови — 400 мл, Н20 - 600 мл. агар - 15 г, pH среды 6.0. Раздробленная морковь смешивается с водой'в соотношении 2:5, отваривается 30 мин, фильтруется, доводится до объема 1 л.
Агар Модесса (Modess. 1941) : глюкоза — 5 г. мальц-экстракт — 5 г, NH4CI — 0.5 г, MgS0a-7H,0 — 0,5 г. КН2Р04 - 0.5 г. FeCi3 - 10 капель (1 %-ный раствор) . Н20 — 1 л, тиамин — 150 мкг, pH среды 5,6.
КНО-агар (Semerdzieva. Cejp. 1966): глюкоза - 5 г, гидролизат казеина — 1 г, мальи-экстракт “-5 г. NH4C1 — 6.5 г. MgS04-7H20 - 0,5 г, КЩР04 —0,5 r,FeS04 х х 7Н2 О — 0.05 г, Н2 О — 1 л. агар — 15 г.
Гидролизат казеина стерилизуется через бактериальный фильтр и добавляется в теплый агар.
Картофельно-глюкозная среда (Пидопличко, 1953): картофель — 200 г, глюкоза — Ют, Н20 — 1 л. агар — 20 г, pH среды оптимальное для каждого вида. Картофель. нарезанный ломтиками, предварительно очищенный и обмытый, варится 30 мин в 1 л воды, отфильтровывается, добавляются агар и вода по объема 1 л.
Агар Возняковской (Возняковская, 1954) : глюкоза — 10 г. гидролизат казеина - 0,75 г, NH4NO3 - 1.0 г, КН2Р04 - 1,0 г, СаС12 - 0,2 г, MgS04-7H20 - 0,5 г, FeCl2 — 1 мг. CuS04* 5Н20 — 1,6 мг, дрожжевой автолизат — 10 мл, тиамин — 150 мкг. агар - 15 г. Н20 — 1 л. pH среды 5.5. Гицролизат казеина и дрожжевой автолизат стерилизуются через бактериальный фильтр и добавляются в теплый агар.
Агар Планкетта (Plunkett. 1953): сахароза — 50 г, аспарагин — 1 г, MgS04 х х 7Н20 — 2,5 г, КН2Р04 — 5,0 г, FeS04*7H20 — 0,03 г, тиамин — 500 мкг, агар — 20 г, Н20 — 1 л, pH среды 5.8.
Несмотря на широкое использование метода изоляции культур из плодовых тел, пока нет единого мнения о способах стерилизации плодовых тел, возрасте карпофоров, пригодных для выделения из них тканевого изолята, наиболее благоприятного места взятия инокулята, его размеров, методов устранения загрязнения посторонней микрофлорой. Далеко не все виды легко образуют мицелиальную культуру из тканевых изолятов. Так, О.Модесс (Modess, 1941) и РМикола (Mikola, 1955) приводят большие списки грибов, которые в культуре не растут. М.Эс-пеншейд (Espenshade, 1962) указывает, что в культуру им были выделены лишь около 50 % видов, из которых изолировались тканевые культуры. В основном
