Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
серологического типирования аденовирусов в реакции нейтрализации и РТГА.
ВОЗБУДИТЕЛИ НЕЙРОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Нейровирусные инфекции вызываются представителями разных семейств,
главным образом РНК-содержащих вирусов, отличающихся друг от друга
многими признаками (табл. 54). К ним относятся тогавирусы, аренавирусы,
рабдовирусы, а также ряд пикорнавирусов, объединенных в род энтеровирусов
- вирусы полиомиелита, Коксаки и ECHO, которые первично репродуцируются в
лимфатических узлах тонкой кишки и выделяются с фекалиями. Однако по
патогенетическим и клиническим признакам вызываемых ими заболеваний
(полиомиелит, серозные менингиты, менингоэнцефалиты и др.) данные вирусы
можно отнести к возбудителям нейровирусных инфекций. В более редких
случаях поражение ЦНС вызывают и ДНК-содержащие вирусы, например
герпесвирусы 1-го и 2-го типов.
Для лабораторной диагностики нейровирусных инфекций существенное значение
имеет стадия заболевания. Почти во всех случаях в течение первых 5-6 сут
вирус обнаруживается в крови (стадия вирусемии), после появления
неврологических
239
симптомов - в ликворе. При некоторых нейровирусных инфекциях, например
полиомиелите, вирус выделяется с фекалиями больного, а при бешенстве -со
слюной. Наиболее доступным методом лабораторной диагностики этих инфекций
являются серологические исследования, которые проводят с помощью РСК,
РТГА, реакции нейтрализации и др. Серологические реакции всегда ставят не
менее чем с двумя сыворотками крови больного, взятыми в острый период
болезни и в стадии реконвалесценции.
Тема 35. ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ И СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ
ДИАГНОСТИКА НЕЙРОИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ
ПИКОРНАВИРУСАМИ, ФЛАВИВИРУСАМИ, ВИРУСАМИ
БЕШЕНСТВА И ЛИМФОЦИТАРНОГО ХОРИОМЕНИНГИТА
Программа занятия
1. Изучение схемы диагностики нейровирусных инфекций.
2. Вирусологическая диагностика полиомиелита.
3. Серологическая диагностика нейровирусных инфекций.
4. Диагностические, профилактические и лечебные препараты, применяемые
гри этих заболеваниях.
Демонстрация
1. Тельца Бабеша - Негри.
2. Диагностйкумы, сыворотки и вакцины, применяемые при диагностике,
лечении и профилактике нейровирусных инфекций.
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Учесть результаты заражения исследуемым материалом культуры клеток.
Отметить наличие и выраженность ЦПД, его характер и наметить план
дальнейшего вирусологического исследования.
2. Учесть результаты идентификации энтеровирусов в реакции нейтрализации
со специфическими иммунными сыворотками. Сделать заключение на основании
полученных данных.
3. Оценить результаты титрования вируснейтрализующих антител в парных
сыворотках больного к эталонным штаммам энтеровирусов. Сделать
заключение.
4. Учесть результаты РСК с парными сыворотками больного энцефалитом и
обосновать серологический диагноз заболевания.
Методические указания Вирусологическая и серологическая диагностика
полиомиелита и инфекций, вызванных вирусами Коксаки и ECHO
Материал для исследования: фекалии, смывы из зева, ликвор. В первые 10
дней заболевания энтеровирусы выделяются с
240
фекалиями и только в течение первых 3 дней обнаруживаются в носоглоточном
отделяемом.
Вирусологическое исследование. Испражнения больного собирают в стерильный
флакон троекратно на протяжении первых 3-5 дней заболевания. Для
уничтожения многочисленной бактериальной флоры обрабатывают их
антибиотиками (смесь пенициллина со стрептомицином, содержащая по 1000
ЕД/мл каждого антибиотика в растворе Хенкса) в течение суток при 4°С,
после чего проводят контрольный высев на стерильность. При отсутствии
бактерий суспензию испражнений используют для заражения клеточных
культур, а при сохранении бактериальной флоры повторно обрабатывают теми
же антибиотиками. Заражают одновременно по 2-3 пробирки с первичной
культурой клеток (фибробластов эмбриона человека или почек обезьян) и
перевиваемой культурой клеток (линии HeLa, амниона человека и др.),
поскольку одни виды энтеровирусов лучше репродуцируются в первичных,
другие - в перевиваемых клетках. Обычно на 2-3-й день после инкубации
зараженных клеточных культур при 35° С наблюдается полная или частичная
дегенерация клеток. При этом интенсив-нось ЦПД зависит от многих причин:
дозы вируса, вида и состояния культуры клеток и др. В случае
слабовьфаженного или полного отсутствия ЦПД проводят дополнительно 2-3
пассажа. При отрицательном результате исследование прекращают, при
положительном-приступают к идентификации выделенного цитопатогенного
агента (вируса). Исследуемый вирус предварительно титруют в той же
клеточной культуре, на которой он был выделен. Для реакции нейтрализации
берут 100 ЦПД50 данного вируса (за 1 ЦПДбо, принимают максимальное
разведение вируса* вызывающее дегенерацию не менее 50% клеток культуры).
Идентификацию энтеровирусов проводят путем серотипирования в реакции
нейтрализации в культуре клеток. С этой целью используют смеси
диагностических моновалентных сывороток или стандартные поливалентные
