Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
грамотрицательных бактерий. Тейхоевые кислоты стабилизируют ионы магния
на поверхности клеток. У грамположительных бактерий на поверхности клетки
имеется комплекс протеин - рибонуклеат магния; соотношение РНК и ДНК в их
цитоплазме составляет 8 :1; у грамотрицательных бактерий это соотношение
равно 1 :1. Иэоэлектрическая точка цитоплазмы у грамположительных
бактерий находится при pH 2,0-3,0, у грамотрицательных - около 5,0. После
обработки раствором йода, являющегося окислителем, происходит сдвиг
изоэлектрической точки в кислую сторону, выраженный у грамположительных
бактерий в большей степени, чем у грамотрицательных.
Кроме того, проницаемость клеточной стенки у грамположительных бактерий
меньше, чем у грамотрицательных. Таким образом, у грамположительных
бактерий создаются оптимальные условия для прочной фиксации красителя и
резистентности к обесцвечиванию спиртом.
Окраска по Граму имеет важное дифференциально-диагностическое значение и
широко используется в микробиологии. К грамположительным бактериям
относятся стафилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии,
микобактерии туберкулеза и др., к грамотрицательным-гонококки,
менингококки, кишечная палочка и др. Некоторые виды бактерий могут
окрашиваться по Граму вариабельно в зависимости от возраста, особенностей
культивирования и других факторов, изменяющих структуру клеточной стенки.
Основная ошибка, допускаемая при окраске по Г раму,
25
состоит в переобесцвечивании или недообесцвечивании мазка спиртом. В
первом случае грамположительные бактерии могут утрачивать первоначальную
окраску генциановым фиолетовым и приобретать красный цвет (характерный
для грамотрицательных бактерий) в результате последующей докраски мазка
фуксином. Во втором случае грамотрицательные бактерии могут сохранять
сине-фиолетовый цвет генцианового фиолетового. Для правильной окраски
следует строго соблюдать технику обесцвечивания (см. п. 3 описания
окраски по Г раму).
Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля- Нельсена. 1. На
фиксированный мазок наносят карболовый раствор фуксина через полоску
фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров в течение 3-5 мин.
2. Снимают бумагу, промывают мазок водой.
3. На мазок наносят 5% раствор серной кислоты или 3% раствор
солянокислого спирта на 1-2 мин для обесцвечивания.
4. Промывают водой.
5. Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5
мин.
6. Промывают водой, высушивают и микроскопируют.
Кислотоустойчивость обусловлена наличием в клеточной
стенке и цитоплазме бактерий повышенного количества липидов, воска и
оксикислот, в частности миколовой кислоты. Раствор карболовой кислоты
разрыхляет клеточную стенку и тем самым повышает ее тинкториальные
свойства, а высокая концентрация красителя и нагревание в процессе
окраски усиливают реакцию взаимодействия красителя с бактериальными
клетками, которые окрашиваются при этом в красный цвет. При обработке
препарата серной кислотой некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и
окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет, а кислотоустойчивые
бактерии остаются окрашенными фуксином в красный цвет (рис. 17).
Окраска спор по методу Ожешкв. 1. На нефиксированный мазок наносят 0,5%
раствор хлористоводородной кислоты и подогревают на пламени горелки в
течение 2-3 мин.
2. Кислоту сливают, препарат промывают водой, просушивают и фиксируют над
пламенем горелки.
3. Окрашивают препарат по Цилю -Нельсену. Споры бактерий при этом
приобретают красный цвет, а вегетативные формы-синий (рис. 18).
Окраска зерен волютина по методу Нейссера. 1. На фиксированный мазок
наносят ацетат синьки Нейссера на 2-3 мин.
2. Наносят раствор Люголя на 10-30 с.
26
\\
3. Промывают препарат водой.
4. Мазок докрашивают водным раствором везувина или хризоидина в течение
'А-1 мин.
5. Промывают водой, высушивают и микроскопируют.
Зерна волютина представляют собой соединения, имеющие
в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию и поэтому избирательно
воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма
клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель
везувин и окрашивается в желтый цвет (рис. 19).
Обнаружение капсул по методу Бурри-Гипса. 1. Готовят препарат по Бурри:
смешивают каплю взвеси микробов с каплей туши и при помощи стекла со
шлифовальным краем готовят мазок так же, как мазки из крови; затем его
высушивают и фиксируют.
2. На мазок наносят водный раствор фуксина на 1-2 мин.
3. Промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. При этом
бактерии окрашиваются в красный цвет, а неокрашенные капсулы контрастно
выделяются на чернорозовом фоне (рис. 20).
Измерение микробов
Все микроскопические объекты измеряются в нанометрах (нм) и микрометрах
(мкм): 1 мкм-=10~3 мм; 1 нм-КГ8 мм; 1 мкм= =-1000 нм. Для измерения
микробов применяются окуляр-микрометр и объект-микрометр. Окуляр-
микрометр служит для непосредственного измерения объекта и представляет
