Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Борисов Л.Б. -> "Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии" -> 72

Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.

Борисов Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии — М.: Медицина, 1984. — 256 c.
Скачать (прямая ссылка): rukovodstvoklabzadaniyampomikroekonomiki1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 66 67 68 69 70 71 < 72 > 73 74 75 76 77 78 .. 96 >> Следующая

cholerae и Vibrio eltor, которые относятся к сем. Vibrion'aceae. Холера -
острое инфекционное заболевание, характеризующееся общей интоксикацией
организма и острым гастроэнтеритом. Чрезвычайно важна быстрая
лабораторная диагностика холеры, так как первые случаи заболевания
требуют бактериологического подтверждения для своевременного принятия
эффективных противоэпидемических мероприятий. Лабораторная диагностика
холеры проводится путем бактериоскопического и бактериологического
исследований. Трудности диагностики связаны с дифференциацией биоваров
холерных виб-
рионов от сходных с ними холероподобных вибрионов (Мечникова, Финклера,
Приора и др.), широко распространенных в природе и непатогенных для
человека.
Программа занятия
1. Изучение схемы микробиологической диагностики холеры.
2. Бактериологическое исследование при холере.
3. Диагностические, профилактические и лечебные препараты, применяемые
при холере.
Демонстрация
1. Мазки, приготовленные из культуры холерного вибриона; окраска по
Граму.
2. Реакция иммобилизации вибриона О-противохолерной сывороткой
3. Тесты для дифференциации холерных вибрионов.
4. Специальный патрон для взятия и транспортировки материала при холере.
5. Противохолерная агглютинирующая сыворотка, холерный бактериофаг,
холерная вакцина, холероген-анатоксин, антибиотики.
Задание для выполнения лабораторной работы
Материал для исследования; испражнения больного с подозрением на холеру;
а) микроскопировать готовые мазки из исследуемой культуры; б) определить
подвижность культуры, выращенной на щелочной пептонной воде;
в) отметить результаты развернутой реакции агглютинации с О-
противохолерной сывороткой; г) отметить наличие или отсутствие роста
исследуемой культуры на среде с полимиксином и результаты гексаминового
теста. Дать заключение по проведенным исследованиям.
Методические указания
Бактериоскопическое исследование (схема 13). Из исследуемого материала
(испражнения, рвотные массы) готовят мазки, окрашивают по Граму и водным
фуксином. Кроме того, из нативного материала готовят препарат "висячая"
капля, в котором определяют наличие подвижных вибрионов при обычной или
фазово-контрастной микроскопии. Обнаружение в мазках большого количества
грамотрицательных, слегка изогнутых палочек (длиной от 1,5 до 3 мкм) и
активноподвижных вибрионов в препарате "висячая" капля позволяет дать
первый предварительный положительный ответ (рис. 75).
Бактериологическое исследование. Материал засевают в различные жидкие и
на плотные питательные среды, в частности, во флаконы со щелочной
пептонной водой (1% пептонная вода, 0,5% хлорида натрия, 0,01% КИОз и
0,2% ШгСОз; pH 9,0), на чашки со щелочным питательным агаром. Посевы на
пептонной воде инкубируют при 37°С в течение 5-6 ч, на чашках -
189
ss
5
n
о
e*
I §
" о
? 3
§ i5
g g
9 *
§ s
I 8
§ I
s i
1 I
tQ
E
§
с ?
I.
hls
ев ж
5 §
? I
E3 p
ce t*
К _?
0 •&
jl
g a s
*L О
1 о "
? e
x
U
i
f
10-12 ч. Из пленки, образующейся на пептонной воде, или из поверхностного
слоя делают мазки и препараты "раздавленная" и "висячая" капля. Этот же
материал используется для постановки реакции агглютинации на стекле со
специфической противохолерной О-сывороткой. Часть пептонной воды
переносят в другую пробирку для постановки нитрозоиндоловой пробы. Для
этого добавляют несколько капель серной кислоты. В положительном случае
появляется розовое окрашивание вследствие образования нитрозоиндола (из
индола и нитритов, которые образуются под влиянием холерного вибриона).
Независимо от результатов исследования делают пересев на вторую пептонную
воду. Наличие грамотрицательных вибрионов, агглютинирующихся О-
сывороткой, позволяет дать второй предварительный ответ. Независимо от
полученных результатов продолжают исследование, как показано на схеме 13.
Выделение чистой культуры и ее идентификацию проводят по 5-6 однотипным
колониям, выросшим на щелочном агаре. Для ускорения хода анализа ставят
развернутую реакцию агглютинации с бактериальной суспензией,
приготовленной из колоний. Для этого агглютинирующую О-сыворотку разводят
в пробирках до титра пептонной водой (в объеме 0,5 мл). Затем в каждую
пробирку вносят 1-2 капли суспензии бактерий. Результат реакции
агглютинации учитывают после 3-4-часовой инкубации при 37°С.
Окончательную идентификацию культуры проводят на основании определения
чувствительности выделенных культур к холерному фагу, их гемолитических
свойств, биохимической активности и агглютинабельности противохолерной О-
сывороткой и типовыми агглютинирующими сыворотками Инаба и Огава (табл.
37). Таким образом, идентификацию культур проводят в три этапа: 1)
устанавливают их принадлежность к роду Vibrio; 2) дифференцируют их от
холероподобных вибрионов в реакции агглютинации с О-сывороткой, по
чувствительности к специфическому фагу и другими тестами; 3) определяют
видовые признаки культур (см. табл. 37).
Окончательное заключение о выделении и дифференцировании холерных
Предыдущая << 1 .. 66 67 68 69 70 71 < 72 > 73 74 75 76 77 78 .. 96 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed