Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Серодиагностика. Применяется для ретроспективного обоснования диагноза
дизентерии при стертых формах, а также для уточнения вида возбудителя.
Ставят реакцию агглютинации по типу реакции Видаля и РПГ А с
эритроцитарными диагностику-мами Флекснера и Зонне. Диагностическим
титром при дизентерии, вызванной шигеллами Флекснера, считают разведение
1:200, а шигеллами Зонне - 1:100.
180
Таблица 34. Международная классификация бактерий рода Shigella
Подгруппа Вид Серовар Подвар
А Sh. dysenteriae 1-10
В Sh. flexneri 1-Й la. lb
2-й 2a, 2b
3-й 3a, 3t*3c
4-й 4a, 4b
5-й
6-Й
С Sh. boydii 1-15
D Sh. sonnei
Микробиологическая диагностика брюшного тифа
и паратифов
Брюшной тиф и п^ратифы вызываются бактериями рода Salmonella, которые по
антигенной структуре относятся к серо-группам D, А и В.
Микробиологическая диагностика тифо-пара-тифозных заболеваний проводится
на основании бактериологического и серологического исследований.
Бактериоскопия первичного материала не применяется, так как в мазках из
испражнений невозможно отличить сальмонеллы от кишечной палочки, а в
другом материале (кровь, желчь) возбудителей слишком мало, чтобы их можно
было обнаружить при микроскопии мазков. Исходя из особенностей патогенеза
брюшного тифа, на 1-й неделе заболевания, в период бактериемии,
возбудителей выделяют из крови (получение гемокультуры), со 2-й недели
заболевания - из испражнений (получение копрокультуры), мочи или желчи.
Антитела в сыворотке накапливаются при брюшном тифе в конце 1-й недели
заболевания.
Методические указания
Бактериологическое исследование (схема 12). Получение гемокультуры. В 1-й
день у больного из локтевой вены шприцем берут 5-10 мл крови и засевают в
колбочку с 50-100 мл среды Раппопорт. Указанные соотношения крови и среды
необходимы для подавления бактерицидного действия белков крови. Посевы
инкубируют при 37°С в течение 18-20 ч. На
2-й день при росте тифозных бактерий наблюдается помутнение
Таблица 35. Ферментативные свойства пшгелл
Вид шнгелл Ферментация Образование
лактозы глюкозы маннита мальтозы сахарозы сорбита
дульцита мочевины серово- дорода индола катал азы
Sh. dysenteriae серовар 1 - к . - - - - - -
- - -
Sh. dysenteriae серовары 2-10 - К - - - - +
- - + ±
Sh. flexneri серовары 1-5 - К + ± ± ± - -
- ± +
Sh. flexneri (Sh. newcastle) серовар 6 - К или КГ ± - -
+ + - - - +
Sh. boydii серовары 1-15 - К + ± - ± ± -
- ± +
Sh. sonnei (+) К + ± (+) ± + - - - +
Условные обозначения: + положительная реакция; - отрицательная реакция;
(+) поздняя реакция, наступающая не ранее 2-3-го дня; ± большее число
штаммов дает положительную реакцию, меньшее - отрицательную; К -
ферментация до кислоты; КГ - ферментация до кислоты и газа.
Схема 12. Микробиологическое исследование при брюшном тифе и паратифах
Материал
Кровь
(на 1-й неделе болезни)
Испражнения, желчь, моча (со 2-н недели болезни)
Сыворотка крови
I I
Бактериологическое исследование-
1-й этап Посев на среду Посев на среду Эндо или другую-
1 1 - j
2-й этап
Регистрация изменений в среде Мазок, окраска по Граму <-
Высев на дифференциальную среду с дальнейшим исследованием по схеме 2-3-
го этапов
Посев на среду Ресселя или трехсахарную среду
Характер колоний
I
Реакция агглютинации на стекле со смесью сальмонел-лезных сывороток
Посев на среду -> обогащения (Мюллера илн селенитовую)
Серодиагностика
I
Реакция агглютинации Видаля
Реакция Vi-гемагглю-тинации *------
Ответ
I
3-й этап
Реакция агглютинации на стекле с поливалентными и моноре-цепторными
сальмо-неллезными сыворотками
Посев на "пестрый" ряд
Регистрация изменения цвета среды *->Фаготипирование
8
Окончательный ответ
и изменение цвета среды. При росте паратифозных бактерий наряду с
указанными изменениями появляются пузырьки газа в поплавке. Для ускорения
ответа из среды Раппопорт делают мазки и препараты "висячая" капля. При
наличии чистой культуры грамотрицательных подвижных палочек и изменении
цвета среды (или наличии газа) дают первый предварительный ответ. Затем
культуру из среды Раппопорт пересевают в пробирку со средой Ресселя,
полагая при этом, что из крови выделена чистая культура и можно сразу
приступить к ее идентификации. Одновременно со среды Раппопорт делают
посевы на среду Эндо для получения изолированных колоний с целью проверки
чистоты выросшей культуры.
Состав среды Ресселя: питательный агар, 1% лактозы, 0,1% глюкозы и
индикатор Андреде. Среду готовят таким образом, чтобы внизу она была в
виде столбика, а верхняя часть имела скошенную поверхность. Исследуемую
культуру засевают уколом в столбик и на поверхность среды. При
ферментации углеводов происходит покраснение среды; разрывы столбика
свидетельствуют о газообразовании. Покраснение всей среды наблюдается при
ферментации лактозы, покраснение только столбика - глюкозы, так как
содержание ее в среде в 10 раз меньше, чем лактозы. Вместо среды Ресселя
можно использовать трехсахарную среду (в ее состав входят глюкоза,
