Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
и дизентериеподобных заболеваний (эшерихиозов)
Возбудителями колиэнтеритов являются эшерихии определенных серогрупп
(026, 055, ОЦ1 и др.), отличающиеся друг от друга антигенной структурой.
Дизентериеподобные заболевания вызываются эшерихиями серогрупп
025,0112,0124 и др. Микробиологическая диагностика этих инфекций
проводится исключительно бактериологическими методами.
Бактериоскопический метод и серодиагностика не применяются.
177
Методические указания
Бактериологическое исследование (схема 10). Испражнения ребенка засевают
на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Посевы
инкубируют при 37°С до следующего дня, затем из части красной колонии
(рис. 73) делают мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. По
морфологии эшерихии практически не отличаются от шигелл и сальмонелл
(рис. 74). Материал из другой части колонии используют для постановки
реакции агглютинации на стекле со смесью ОВ-сывороток, содержащих
антитела против наиболее распространенных серогрупп энтеропатогенных
эшерихий. Обычно проверяют на агглютинабельность не менее 10 колоний с
каждой чашки. При положительном результате ставят реакцию агглютинации с
сыворотками 026:В6, 055:В5, 0111:В4, 0124:В17 и др., после чего делают
предварительное заключение. Затем пересевают несколько агглютинабельных
колоний на скошенный питательный агар для получения чистых культур. На 3-
й день проверяют агглютинабельность чистых культур в реакции агглютинации
на стекле со смесью ОВ-сыво-
Схема 10. Бактериологическое исследование при колиэитеритах и
дизентериеподобных заболеваниях (эшерихиозах)
Материал Испражнения
I
1-й этап Посев на среду
Эндо
2-й этап Характер и цвет колоний л 1 1 > Реакция
агглютинации на
Мазки, окраска по Граму с стекле с материалом из
отдельных колонии и сме-
сями ОВ-сывороток
Ответ
I
Пересев агглютинабельных колоний на скошенный питательный агар (чистая
культура)
3-й этап Реакция агглютинации на стекле со смесями ОВ-сы-вороток
Реакция агглютинации с
типоспецифическими
сыворотками
•J
I- <-1
Развернутая реакция аг-' глютинацин
¦ Посев на "пестрый" ряд
Окончательный ответ
178
Рис. 74. Возбудители тифо-пара-тифозных заболеваний.
/ S. typhi; 2 - S. paratyphi; 3 Е. coli.
роток, а затем с отдельными ОВ-сыворотками. При положительном результате
ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с соответствующей ОВ-
сыво-роткой. Для этого готовят два ряда разведений агглютинирующей ОВ-
сыворотки.
В пробирки первого ряда вносят живую исследуемую культуру Е. coli,
второго ряда - ту же культуру, предварительно прокипяченную на водяной
бане в течение часа. Использование в качестве антигена убитых нагреванием
бактерий связано t наличием у живых К-антигена, который часто
препятствует проявлению О-агглютинабельности.
Микробиологическая диагностика дизентерии
Возбудителями бактериальной дизентерии являются микроорганизмы,
относящиеся к роду Shigella. Современная классификация шигелл приведена в
табл. 34.
Микробиологическая диагностика дизентерии проводится главным образом
бактериологическим методом.
Методические указания
Бактериологическое исследование (схема 11). Фекалии больного засевают на
среду Плоскирева. При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или
слизисто-кровянистых комочков их выбирают петлей, промывают в
изотоническом растворе хлорида натрия и наносят на поверхность среды
Плоскирева, после чего тщательно растирают шпателем. На 2-й день
прозрачные бесцветные колонии пересевают на среду Ресселя
' N
' (
* \
У""
179
Схема 11. Микробиологическое исследование при дизентерии
Материал
1-й этап
2-й этап
3-й этап
Испражнения
I
Бактериологическое исследование 1
Посев на дифференциальные среды (П лоскирева и др.)
Характер и цвет колоний Мазок, окраска по Г раму *¦ Реакция агглютинации
на < стекле со смесями дизентерийных сывороток
Ответ
Сыворотка крови
I
Серодиагностика
i
Реакция агглютинации (по типу реакции Видаля) с дизентерийными диа-
гностикумами. РПГ А с эритроцитарными диа-гностикумами
Ответ
Пересев бесцветных колоний на среду Рес-селя или трехсахарную среду
Мазок, окраска по Г раму Регистрация изменений "-цвета среды
1
Посев на "пестрый" ряд • Реакция агглютинации на стекле со смесями
дизентерийных сывороток, а затем с видовыми и типовыми сыворотками
Окончательный ответ
или на короткий "пестрый" ряд с лактозой и глюкозой. Оставшуюся часть
колоний используют для постановки ориентировочной реакции агглютинации на
стекле со смесью дизентерийных сывороток и смесью сывороток против
сальмонелл (для исключения брюшного тифа или сальмонеллеза).
Окончательное заключение дают на 4-й день по результатам изучения
ферментативных свойств (табл. 35) и реакции агглютинации.
Колициногенотшщрование. Шигеллы Зонне содержат разные типы колициногенных
факторов, которые обнаруживаются с помощью специального набора
индикаторных штаммов. Коли-циногенотипирование может быть использовано
для эпидемиологических целей.
