Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
культура) I
1 I 1
Рост на пи- Проба на уреазу
тателыюм Реакция агглютинации
агаре (пигмент)
Окончательный
Микробиологическая диагностика коклюша
Бактериоскопическое исследование (схема 7). Для быстрого обнаружения и
идентификации Bordetella pertussis используют иммунофлюоресцентный метод.
Материал берут стерильным ватным тампоном из носоглотки больного ребенка.
Для взятия материала у маленьких детей тампон, приготовленный на тонкой
эластичной проволоке, вводят через нос. Тампоном делают два мазка,
высушивают их на воздухе и фиксируют на пламени. Один мазок обрабатывают
флюоресцирующей иммунной противококлюшной сывороткой, другой -
паракоклюш-ной сывороткой. Препараты микроскопируют в люминесцентном
микроскопе; просматривают не менее 50 полей зрения.
160
Рис. 69. Bordetella pertussis (чистая культура).
В положительном случае обнаруживают В. pertussis, для которых характерны
темные клетки с четким светящимся венчиком.
Бактериологическое исследование. Основной метод лабораторной диагностики
коклюша. Материал для посева берут носоглоточным тампоном (см. выше) или
методом "кашлевых пластинок". Для этого в момент появления кашля открытую
чашку Петри с питательной средой подносят ко рту ребенка и держат в
течение 6-8 кашлевых толчков. Правильное и раннее взятие материала
позволяет выделить коклюшные микробы в начальном периоде болезни от 80-
90% больных. Материал засевают на КУА или кровяные среды - картофельно-
глицериновый кровяной агар Борде-Жангу и молочно-кровяной агар. В
питательные среды добавляют пенициллин для угнетения роста посторонней
микрофлоры. Колонии В. pertussis на указанных средах обычно появляются
через 48-72 ч культивирования, паракоклюшные- несколько раньше: через 24-
72 ч. Бордетеллы образуют мелкие (диаметром около 1 мм) выпуклые влажные
блестящие колонии. На КУА колонии имеют серовато-кремовый цвет, а на
среде Борде-Жангу приобретают жемчужный или ртутный блеск. Колонии
паракоклюшных бактерий более крупные. На среде Борде-Жангу и молочно-
кровяном агаре они образуют ограниченную зону гемолиза. Из колоний,
выросших на чашках, готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.
При наличии в мазках овоидных грамотрицательных палочек (рис. 69) ставят
ориентировочную реакцию агглютинации с коклюшной и паракоклюшной
сыворотками. Затем подозрительные колонии пересевают в пробирки для
дальнейшего изучения чистых культур бордетелл (табл. 30).
В отличие от других бордетелл В. pertussis не растут на питательном агаре
и не изменяют цвета специальных питательных сред.
Для определения уреазы в агглютинационные пробирки вносят ОД мл 2%
раствора мочевины, 0,3 мл густой суспензии испытуемой культуры и 2-3
капли
7-639
161
Таблица 30. Дифференциальные признаки бордетелл
Признак B.pertussis B.parapertussus B.bronchisepticus
Рост на агаре (простом) - + с коричневой окраской +
То же с тирозином + с ярко-коричневой окраской +
Изменение цвета;
КУА - Буро-коричневый -
кровяного агара - Потемнение -
Образование уреазы - + +
Наличие антигенов:
родового (общего) 7 7 7
видового (специфиче-
ского) 1 14 12
Условные обозначения: + наличие признака; - отсутствие признака; цифрами
обозначены номера антигенов.
0,1% спиртового раствора фенолфталеина. В положительном случае через 20-
30 мин появляется малиновое окрашивание, указывающее на расщепление
мочевины уреазой.
Установление серологической специфичности бордетелл, дифференциацию видов
и определение сероваров проводят в реакции агглютинации с
адсорбированными факторными сыворотками. При этом исходят из того, что
антиген (фактор) 7 является родовым, а антиген (фактор) 1 присущ только
В. pertussis, 14 - В. parapertussis и 12 - В. bronchiseptica.
Бактериологическое исследование продолжается не менее 5 дней. При
бактериологической диагностике коклюша может возникнуть необходимость
дифференциации бордетелл от гемоглобинофильной бактерии Haemophilus
influenzae, относящейся к роду Haemophilus. Палочка инфлюэнцы часто
встречается на слизистой оболочке дыхательных путей и вызывает ряд
воспалительных заболеваний. В отличие от бордетелл Н. influenzae
выращивается только на кровяных питательных средах - кровяном агаре,
"шоколадном" агаре Левинталя, содержащих Х-фактор (гемин) и V-фактор
(коэн-зим дегидрогеназы). Идентификацию выделенной культуры производят на
основании комплексного изучения морфологических, культуральных,
биохимических и серологических свойств.
Серодиагностика. Реакция агглютинации и РСК применяются в основном для
ретроспективного подтверждения диагноза и дифференциальной диагностики
атипичных форм коклюша. Агглютинины в крови больных появляются на
162
3-4-й неделе заболевания в титрах 1 20 и выше. В условиях массовой
вакцинации детей против коклюша диагностическое значение имеет нарастание
титра антител в динамике болезни, поэтому реакцию ставят повторно через
4-5 дней.
Диагностические, профилактические и лечебные
препараты
