Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
протея, вейллонеллы, пептококка, пептострептококка, бактероида и
клосгридий.
2. Методика посева для выделения облигатных анаэробов.
3. Аппаратура и питательные среды для выращивания анаэробов.
141
4. Пестрые ряды с культурами клостридий - возбудителями раневой
анаэробной инфекции.
5. Определение перфрингенс-токсина в раневом отделяемом с помощью
лецитовителлазной пробы.
Зядапве для выполнения лабораторной работы
1 Бактериоскопическое исследование; приготовить мазки из гноя, окрасить
их по Граму и микроскопировать. Сделать предварительное заключение и
наметить ход дальнейшего анализа.
2. Сделать окончательное заключение о возбудителе или возбудителях
раневой инфекции на основании бактериоскопических, бактериологических,
биохимических и других данных, полученных из бактериологической
лаборатории.
Методические указания
Материал для исследования: гной, раневое отделяемое, отечная жидкость,
кусочки мышечной ткани, перевязочный материал и др.
Микробиологическая диагностика раневой и гнойной
аэробной инфекции
Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого материала готовят
мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Обнаружение в мазках
разных форм бактерий (стафилококка, стрептококка, грамотрицательных или
грамположитель-ных палочек) позволяет сделать предварительное заключение.
Бактериологическое исследование. 1. Методы выделения чистых культур
стафилококков и стрептококков и их идентификация описаны выше.
2. Для выделения культуры бактерий Pseudomonas aeruginosa (синегнойная
палочка) исследуемый материал засевают на питательный агар в чашки Петри
с целью получения изолированных колонии. Посевы инкубируют при 37°С в
течение суток. Синегнойная палочка образует круглые плоские слизистые
колонии с характерным сине-зеленым пигментом, который диффундирует в
агар. При бактериоскопии нативных препаратов в "раздавленной" или
"висячей" капле, приготовленных из колоний, обнаруживаются подвижные и
слегка изогнутые палочки, в мазках, окрашенных по Граму, -
грамотрицательные палочки. Для установления вида получают чистую
культуру, которую идентифицируют по биохимическим признакам. Патогенные
штаммы Pseudomonas aeruginosa образуют белковые токсины (экзотоксины):
гистотоксин, обладающий цитотокси-ческим свойством, и лейкоцидин,
лизирующий лейкоциты человека, которые могут быть обнаружены путем
биопробы.
142
3. Для выделения культуры бактерий Е. coii исследуемый материал засевают
на одну из дифференциально-диагностических сред (например, среду Эндо, на
которой кишечная палочка образует красные колонии). Дальнейшая
идентификация выделенной чистой культуры с определением серовара описана
на с. 178).
4. Для выделения культуры бактерий рода Proteus исследуемый материал
вносят в конденсационную воду скошенного в пробирке питательного агара
(метод Шукевича). Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-20 ч.
Характерным признаком протея является ползучий рост снизу вверх по
поверхности скошенного агара. При бактериоскопии препаратов в "висячей"
или "раздавленной" капле видны подвижные палочки, в мазках, окрашенных по
Г раму, - грамотрицательные палочки. Дальнейшая идентификация выделенной
чистой культуры Proteus до вида (Proteus vulgaris, Proteus mirabilis и
др.) описана в теме 30.
Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных процессов, вызванных
неспорообразующими анаэробными бактериями
Возбудителями разнообразных гнойно-воспалительных процессов довольно
часто являются неспорообразующие анаэробные бактерии, принадлежащие к
родам Bacteroides, Veillonella, Peptococcus, Peptostreptococcus. Они
вызывают как моноинфекции, так и смешанные инфекции во всевозможных
сочетаниях друг с другом и с аэробными бактериями - Pseudomonas
aeruginosa, Proteus vulgaris, E. coii, кокками. Для микробиологической
диагностики этих заболеваний главным образом осуществляют
бактериологическое исследование в строго анаэробных условиях, так как
даже незначительное количество кислорода воздуха резко тормозит
размножение бактерий, в результате чего они не растут на питательных
средах.
Взятие материала (гной, отделяемое раны, отечная жидкость) производят
шприцем с хорошо притертым поршнем до полного его заполнения и вытеснения
воздуха. Затем шприц надевают на иглу, вставленную через резиновую пробку
в пробирку со смесью инертных газов (N2 + Нг) и СОг, и вводят в нее
исследуемый материал.
Бактериологическое исследование. Посевы производят в пробирку с
предварительно прокипяченной средой Китта-Тароцци и в пробирку с
полужидким тиогликолевым агаром. В его состав входят дрожжевой экстракт,
триптон, цистеин, хлорид натрия, тиогликолевая кислота, метиленовый синий
и 0,75%
143
Таблица 24. Дифференциальные признака песпорообразукших п спорообразумшнх
анаэробных бактерий
+ + + I XXX+I+ +
"С
. Е
.2 з
S X
х ?
" 5 SS
+ + + I +Х I + | + +
о К
S В*
К о
с; ч
за
5Е
" 3
. О
I I I + * + +
!Р
С О
+ + + о XII+X++
I
S3
