Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Занятие 1-е
Микробиологическое исследование гноя при подозрении на стафилококковую
или стрептококковую инфекцию. Материал - гной из раны (раневое
отделяемое). Микробиологическое исследование для выявления источника
стафилококковой внутрибольничной инфекции. Материал - мазки, взятые
тампоном из зева и со слизистой оболочки носа людей (обслуживающий
персонал больничного отделения), обследуемых на носительство
стафилококка.
1. Бактериоскопическое исследование: приготовить, окрасить по Граму и
микроскопировать мазки из гноя и зева. Сделать заключение и наметить план
дальнейшего анализа
2. Бактериологическое исследование: учесть результаты готовых посевов
гноя и мазков из зева на чашки с кровяным агаром: а) описать колонии и
отметить наличие гемолиза; б) приготовить, окрасить по Граму и
микроскопировать мазки из колоний; в) пересеять колонию, в мазке из
которой видны стафилококки, в пробирку со скошенным питательным агаром
для получения
133
чистой культуры стафилококка и другую, содержащую цепочки кокков, колонию
- на скошенный кровяной агар и сахарный бульон для получения чистой
культуры пиогенного стрептококка.
Занятие 2-е
1. Продолжение бактериологического исследования гноя и мазков из зева и
носа бактерионосителей: а) отметить характер роста культур в пробирке с
питательным агаром, в частности наличие золотистого пигмента. Сделать
мазок, окрасить по Граму и микроскопировать; б) отметить характер роста
культур в пробирке с кровяным агаром (наличие гемолиза) и в пробирке с
сахарным бульоном (помутнение, осадок). Сделать мазок, окрасить по Граму
и микроскопировать.
2. В случар выделения золотистого стафилококка: а) определить его
способность продуцировать плазмокоагулазу; б) установить фаготипы
стафилококков, выделенных из разных источников - больных и
бактерионосителей по готовым пробам или полученным от преподавателя
данным.
3. Отметить по готовым посевам чувствительность выделенных стафилококков
к антибиотикам. Сделать окончательное заключение на основании анализа
собственных, демонстрационных и полученных из лаборатории данных о видах
выделенных культур стафилококка и стрептококка и об их патогенных
свойствах. Определить источник госпитальной инфекции на основании
фаготипо! выделенных от больных и носителей стафилококков.
Методические указания
Материал для исследования: гной, экссудат, раневое отделяемое,
перевязочный материал, слизь из носоглотки, мазки из зева; при подозрении
на сепсис - кровь.
Микробиологическая диагностика стафилококковых
инфекций
Бактериоскопическое исследование (схема 2). Из исследуемого материала (за
исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают
по Граму и микроскопируют. Наличие в препаратах грамположительных кокков,
располагающихся в виде скоплений, напоминающих виноградные гроздья (рис.
62), позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой
инфекции.
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают петлей на
чашки с кровяным агаром и ЖСА для получения изолированных колоний. Посевы
инкубируют при 37°С. На следующий день исследуют выросшие колонии на
обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза
(рис. 63). На ЖСА Staph, aureus образуют золотистые круглые выпуклые
непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих
лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым
оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2-3 колонии
пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения
чистых культур. На следующий
134
?
Ю
>S
3
?-
о
с;
о
С
о,
Ч
S
X
о
ч
о
Ч
о
с.
С
О
СЗ А
и
о
С
о
ч
х
"s g
s"
о о 8 ?
5 х
о 3
4 к
К Ю
?&'
*| 5 (r) Л sc X
В я х
н о й о ю (r) S о
5 о &
1*1 S s Е 0^0 о S и О ^ ed
Cs(c)
4
cd
5
135
Определение чувствительности к антибиотикам
Таблица 22. Дифференциальные признаки стафилококков
Признак Вид
Staph, aureus Staph, epider-midis Staph, sapro-phyticus
Образование:
плазмокоагулазы + - -
лецитиназы + - -
Ферментация:
глюкозы + + -
маннита в анаэробных условиях + - +
Образование а-токсина + - -
Чувствительность к новобиоцину S S R
Условные обозначения. + наличие признака; - отсутствие признака; S -
чувствительный; R - резистентный.
день делают посевы с целью определения их дифференциальных признаков
(табл. 22).
Постановка реакции на плазмокоагулазу. Разведенную в 2 раза плазму крови
разливают по 0,4 мл в пробирки, в которые вносят одну петлю исследуемых
чистых культур стафилококка, и помещают в термостат при 37°С. Через 2, 4
и 24 ч отмечают результаты опыта. При наличии плазмокоагулазы образуется
сгусток.
В некоторых случаях наряду с плазмокоагулазой и лецито-вителлазой
определяют другие ферменты - фибринолизин, гиалуронидазу и ставят
дермонекротическую пробу на кролике. "Для этого на боку кролика
выщипывают шерсть и внутрикожно вводят 0,2 мл взвеси исследуемой
