Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Борисов Л.Б. -> "Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии" -> 46

Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.

Борисов Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии — М.: Медицина, 1984. — 256 c.
Скачать (прямая ссылка): rukovodstvoklabzadaniyampomikroekonomiki1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 40 41 42 43 44 45 < 46 > 47 48 49 50 51 52 .. 96 >> Следующая

Комплемент в разведении 1:5 03 0,2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Изотонический раствор хлорида натрия 03 0,4 03 0,4 0,5 0,6
0,7 0,2
Избыток, который удаляется из пробирки 0,4 0,4 0,2 03 0,4 0,5
0,6
Получаемые разведения комплемента 1:10 1:15 1:20 1:25 1:30 1:35 1:40

Гемолитическая система 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4
Инкубация при 37°С в течение 30 мин
Результаты
Антигены изготовляются - производственными институтами из взвесей убитых
микробов, лизатов микробов, полных антигенов, гаптснов, экстрактов
тканевых липидов.
Взвесь эритроцитов барана получают из дефибри-нированной крови барана,
отмывая эритроциты изотоническим раствором хлорида натрия до полной
бесцветности и прозрачности надосадочной жидкости, и готовят из них 3 %
взвесь в изотоническом растворе хлорида натрия.
Гемолитическая сыворотка, приготовленная путем 3-4-кратной внутривенной
иммунизации кролика 50% взвесью бараньих эритроцитов, инактивирована при
56°С (разрушен комплемент) и на этикетке ампул имеет обозначенный титр -
максимальное разведение данной сыворотки, которое обеспечивает полный
лизис 3 % взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента при 37°С в
течение часа (рис. 61). Для РСК в качестве рабочей дозы берут
гемолитическую сыворотку в тройном титре.
Постановка основного опыта. После установления титра и рабочих доз всех
ингредиентов ставят основной опыт РСК (табл. 19). Испытуемую и
контрольные сыворотки предварительно инактивируют нагреванием при 56°С в
течение 30 мин. Стандартная схема постановки РСК предусматривает
проведение первой фазы - соединение антигена, испытуемой сыворотки и
комплемента при 37°С в течение 30 мин. При постановке РСК на холоду эту
фазу проводят при 0-4°С в течение 18-20 ч, что повышает чувствительность
реакции.
121
Таблица 19. Основной опыт реакции связывания комплемента (форма
протокола)
Ингредиенты, мл № пробирки
1 2 3 4 5 6 7
Испытуемая сыворотка в разведении 1 :5 0,2 0,2
Положительная сыворотка - 0,2 - - - -
Отрицательная " - - 0,2 - - - -
Антиген 0,2 0,2 0,2 - ОД - -
Изотонический раствор хлорида натрия 0,2 0,2
0,4 0,6
Комплемент в рабочей дозе 0,2 0,2 0,2 0,2 ОД ОД -
Инкубация на холоду при 0-4°С в течение 18- -20 ч или при
37°С в течение 30 мин
Г емолитическая система 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4
Инкубация при 37°С в течение 20-30 мин
Результаты
После добавления в каждую пробирку по 0,4 мл гемолитической системы
пробирки встряхивают и выдерживают 20-30 мин при 37°С. Результаты опыта
оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках (см.
табл. 19): реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза,
когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно,
отрицательной-при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно
окрашена ("лаковая кровь"). Степень задержки гемолиза оценивают в
зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка
эритроцитов на дне (I I I I, +++,-Н-, +).
В качестве контроля (2-я и 3-я пробирки) учитывают реакцию с заведомо
положительной и заведомо отрицательной сыворотками; 4-я и 5-я пробирки
служат для проверки анти-комплементарных свойств сыворотки и антигена; в
6-й и 7-й пробирках контролируется качество комплемента и гемолитической
системы.
122
Тема 21. ВАКЦИНЫ И ИММУННЫЕ СЫВОРОТКИ
Программа занятия
1, Способы приготовления вакцин.
2. Получение диагностических и лечебно-профилактических сывороток.
Вакцинами называются препараты, предназначенные для создания
искусственного активного иммунитета. Некоторые вакцины применяют для
лечения инфекционных заболеваний. Вакцины делят на живые и убитые,
корпускулярные и химические. К вакцинным препаратам относятся также
анатоксины.
Живые' вакцины готовят из микроорганизмов, обладающих стойко сниженной
вирулентностью, но сохранивших иммуноген-ные свойства. Убитые
(температурой или действием химических веществ) корпускулярные вакцины
содержат инактивированные микроорганизмы. Химические вакцины готовят из
антигенов, экстрагированных из бактериальных клеток химическими методами.
Анатоксины готовят из экзотоксинов, обезвреженных формалином.
Вакцины выпускают в жидком и сухом виде. Сухие вакцины состоят из
микроорганизмов, высушенных методом лиофили-зации.
Все вакцинные препараты подлежат государственному контролю для
установления их безвредности, иммуногенности и стерильности (для убитых
вакцин). Признаками негодности вакцин являются наличие посторонних частиц
и хлопьев, изменение физических свойств и цвета, повреждение ампулы и др.
Иммунные сыворотки делятся на лечебно-профилактические и диагностические.
Лечебно-профилактические сыворотки и иммуноглобулины получают из крови
гипериммунизированных лошадей или крови иммунизированных или переболевших
людей.
Диагностические сыворотки получают путем иммунизации кроликов. Эти
сыворотки подразделяются на агглютинирующие, преципитирующие и
гемолитические; применяются для постановки серологических реакций с целью
Предыдущая << 1 .. 40 41 42 43 44 45 < 46 > 47 48 49 50 51 52 .. 96 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed