Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
присутствии лимфокина миграция клеток резко заторможена и зона миграции
уменьшена.
Определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов по Манчини.
Образцы исследуемых сывороток помещают в лункй агарового геля, который
содержит антитела против IgM, IgG или IgA в известной концентрации.
Диффундирующие
106
в агар иммуноглобулины образуют кольца преципитации с антиглобулиновыми
антителами, размер которых зависит от содержания в сыворотке
иммуноглобулинов соответствующего класса. Уровень сывороточных
иммуноглобулинов отражает функциональное состояние В-системы иммунитета.
Постановка и оценка кожно-аллергической пробы. Для выявления
специфической сенсибилизации (при туберкулезе, бруцеллезе и других
инфекционных заболеваниях) ставят кожные аллергические пробы. Например,
при постановке пробы Манту туберкулиновым шприцем внутрикожно вводят
раствор туберкулина определенной концентрации. Реакцию учитывают через 24
и 48 ч, определяя степень ее выраженности. Гиперемию и инфильтрат вокруг
места введения оценивают следующим образом: + размером до 5 мм, 4+до 1
см, 444больше 1 см, а также наличие везикулы и лимфангита (рис. 50).
Тема 18. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ.
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ
Программа занятна
1. Изучение реакции агглютинации: механизм, роль отдельных ингредиентов,
диагностическое применение для определения титра специфических антител в
сыворотке крови больных и идентификации вида микроорганизма.
2. Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА, РНГА) и реакция
торможения пассивной гемагглютинации (РТПГ А)..
3. Метод выявления неполных антител (проба Кумбса).
Реакция агглютинации бактерий протекает в две фазы. Первая,
специфическая, невидимая фаза реакции агглютинации состоит во
взаимодействии антител с антигенными детерминантами, расположенными на
поверхности бактерий и других корпускулярных частиц. Вторая, видимая,
фаза реакции, протекающая лишь в присутствии электролита в среде,
заключается в склеивании и оседании на дно пробирки иммунных комплексов в
виде хлопьев или зерен, видимых невооруженным глазом.
Кроме специфической агглютинации бактерий, вызванной антителами, возможна
спонтанная агглютинация (в отсутствие иммунной сыворотки). Спонтанную
агглютинацию дают R-фор-мы бактерий, не образующие гомогенной взвеси в
изотоническом растворе хлорида натрия и осаждающиеся в виде клеточных
агрегатов. При кислой реакции среды в результате снятия одноименного
заряда с поверхности бактериальных клеток в изоэлектрической зоне
происходит склеивание - наступает "кислотная" агглютинация.
107
В лабораторной диагностике инфекционных заболеваний реакцию агглютинации
очень часто применяют как для идентификации видов и сероваров бактерий с
помощью диагностических агглютинирующих сывороток, так и для определения
присутствия антител в сыворотке больного по известным антигенам
(диагностикумам), т. е. для серодиагностики.
Количество агглютинирующих антител в иммунной сыворотке оценивается их
титром-наибольшим разведением сыворотки, в котором еще наблюдается
.выраженная (++) реакция агглютинации со взвесью бактерий.
При различных инфекционных заболеваниях накопление специфических антител
в сыворотке идет с неодинаковой скоростью и достигает разных величин. В
связи с этим принято говорить о диагностическом титре антител - той
величине титра, при которой можно с уверенностью поставить серологический
диагноз заболевания в определенный его период. При многих инфекциях
наиболее надежным диагностическим признаком считается не наличие антител,
а нарастание их титра в динамике заболевания, которое выявляется путем
постановки серологических реакций с парными сыворотками, т. е.
полученными дважды от одного и того же больного.
Реакция агглютинации внешне проявлется по-разному в зависимости от
величины клеток, наличия жгутиков у бактерий и антител к ним.
При работе с растворимыми, мелкодисперсными антигенами применяют реакцию
непрямой, или пассивной, гемагглютинации (РПГА). Антиген предварительно
адсорбируют на инертных монодисперсных частицах или клетках, например на
эритроцитах, готовят эритроцитарный диагностикум. Такие нагруженные
антигеном эритроциты склеиваются под действием иммунной сыворотки,
содержащей антитела к данному антигену (РПГА). Реакция отличается высокой
чувствительностью и позволяет выявлять сравнительно небольшие
концентрации антител в исследуемых сыворотках. При необходимости
обнаружения антигена в исследуемом материале эритроциты предварительно
нагружают специфическими антителами и также ставят РПГ А.
При помощи РПГА определяют полные (бивалентные) антитела. Неполные
(моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этим методом, так
как, соединяясь с антигеном, блокируют его, но не могут вызвать агрегации
частиц в крупные конгломераты. Для выявления неполных, например
антирезусных, антител в исследуемой сыворотке используют специальную
реакцию - пробу с антиглобу-линовой сывороткой, которая получила название
