Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Борисов Л.Б. -> "Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии" -> 39

Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.

Борисов Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии — М.: Медицина, 1984. — 256 c.
Скачать (прямая ссылка): rukovodstvoklabzadaniyampomikroekonomiki1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 96 >> Следующая

разведений токсина (или культуры бактерий) вводят нескольким группам
животных. Через определенный срок отмечают число погибших животных в
каждой группе и производят расчет LD50.
Иммунизация кролика для получения иммунной сыворотки. Для получения
иммунной сыворотки проводят цикл иммунизации кролика убитой вакциной -
взвесью убитых бактерий, содержащей 1 млрд. микробных тел в 1 мл. Вакцину
вводят в краевую вену уха кролика 3 раза с интервалами в 6 дней. Через 7
дней после последнего введения антигена у кролика берут кровь, из которой
готовят сыворотку и титруют для выявления в ней антител.
Рве. 48. Дермонекротическая проба. а - отрицательная реакция; б - положи-
тельная реакция.
Тема 16. ФАГОЦИТОЗ И ДРУГИЕ ФАКТОРЫ ЕСТЕСТВЕННОГО ИММУНИТЕТА
Естественный иммунитет организма обеспечивается клеточными факторами
(микро- и макрофаги крови и тканей), а также гуморальными вне- и
внутрисосудистыми факторами (лизоцим,
102
комплемент и другие белки сыворотки крови). При оценке иммунологического
статуса организма принято определять фагоцитарную активность лейкоцитов
крови, уровни содержания в сыворотке крови лизоцима и комплемента.
Программа занятия
1. Изучение стадий фагоцитоза и фагоцитирующих клеток в опыте фагоцитоза
in vivo (в организме подопытного животного).
2. Определение фагоцитарных показателей и показателя опсонофагоци-тарной
реакции в опыте in vitro (в исследуемой крови людей).
3. Исследование гуморальных факторов естественного иммунитета.
Демонстрация
1. Миграция и хемотаксис фагоцитирующих клеток.
2. Фагоцитоз бактерий в тканевой культуре макрофагов.
3. Незавершенный фагоцитоз гонококков в мазке из уретрального гноя
больного гонореей.
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Учесть результаты посева крови из трупа белой мыши, сделанного на
прошлом занятии, и дать заключение.
2. Заразить белую мышь внутрибрюшинно взвесью стафилококка для изучения
явления фагоцитоза in vivo. Проанализировать защитную роль фагоцитоза в
организме.
3. Определить показатель опсонофагоцитарной реакции на основании подсчета
фагоцитарных показателей в готовых мазках, приготовленных ранее при
постановке этой реакции in vitro. Сделать заключение.
4. Провести иммунизацию кролика убитой вакциной (третье введение
антигена).
5. Учесть и оценить результаты определения титра лизоцима в слюне.
Методические указания
Постановка опьгга фагоцитоза на белых мышах. За 24 ч до постановки опыта
белым мышам вводят внутрибрюшинно по 2-3 мл стерильного 1% раствора
крахмала. Это вызывает скопление в брюшной полости фагоцитирующих клеток
как результат асептического воспаления и хемотаксиса фагоцитов к
крахмалу. Затем мыши вводят внутрибрюшинно 1 мл двухмиллиардной взвеси
белого стафилококка. Через 30 мин брюшную стенку мыши прокалывают концом
тонкого капилляра пастеровской пипетки и набирают несколько капель
экссудата. Из него готовят мазки на предметных стеклах, высушивают на
воздухе, фиксируют и окрашивают раствором метиленового синего в течение
3-4 мин.
При микроскопии мазков отмечают наличие микрофагов (полиморфно-ядерных
клеток) и макрофагов (мононуклеаров)
103
с поглощенными стафилококками, окрашенными в интесивно синий цвет на фоне
светло-голубой цитоплазмы фагоцитов (рис. 49). Отмечают в препарате
отдельные стадии фагоцитоза: прилипание, захват, частичное переваривание.
Постановка опсонофагоцитарнон реакции. В пробирку с одним объемом
стерильного 2% раствора цитрата натрия вносят два объема свежевзятой
крови и один объем взвеси бактерий, содержащей 1 млрд/мл микробных
клеток, убитых нагреванием при 80°С в течение часа. Содержимое пробирки
перемешивают, инкубируют в течение 30 мин при 37°С, затем готовят мазки и
окрашивают по Романовскому-Гимзе. В мазке подсчитывают количество
бактерий, захваченных каждым из 25 нейтрофилов. По результатам учета
определяют следующие фагоцитарные показатели: фагоцитарный показатель
(индекс) - процент фагоцитирующих нейтрофилов, фагоцитарное число -
среднее количество фагоцитированных бактерий на один нейтрофил.
Показатель опсонофагоцитарной реакции (ПОФР) вычисляют по формуле: ПОФР =
За + 2b + lc + 0d, где а -число нейтрофилов, содержащих свыше 41
бактерии; Ъ - число нейтрофилов, содержащих 21-40 бактерий; с-число
нейтрофилов, содержащих от 1 до 20 бактерий; d- число нейтрофилов, не
содержащих бактерий. Максимальный показатель при такой системе учета
составляет 75. Ориентировочно считают, что показатель в пределах 10-24
характеризует слабоположительную реакцию, 25-49 - ясно выраженную, 50-75
- резко положительную реакцию. Ясно выраженная и резко положительная
реакции характеризуют опсонизирующую активность сыворотки больного и
функциональную активность фагоцитов.
- Определение титра лизоцима в слюне. Готовят ряд последовательных
разведений слюны в пробирках, в каждую из которых вносят по 1 мл
суспензии суточной культуры Micrococcus lysodeiticus, содержащей 1
млрд/мл микробных тел. После инкубации в термостате в течение 3 ч
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 96 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed