Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
изучения иммунной системы организма, обеспечивающей специфический
иммунный ответ, дано краткое описание основных методов исследования
иммуно-компетентных клеток (Т- и В-лимфоцитов). Основное внимание следует
уделить изучению серологических реакций, которые широко используются при
лабораторной диагностике различных заболеваний, а также принципам
применения специфических диагностических, лечебных и профилактических
препаратов.
Тема 15. ПАТОГЕННОСТЬ И ВИРУЛЕНТНОСТЬ МИКРОБОВ.
ТОКСИНЫ
Программа двух занятий
1. Методы экспериментального заражения и иммунизации животных.
2. Бактериологическое исследование трупов павших животных.
3. Изучение факторов патогенности бактерий.
4. Методы определения силы токсина.
Демонстрация
1. Методы выявления факторов патогенности, подавляющих защитные механизмы
организма хозяина: капсулы у патогенных бактерий, корд-фактора у
патогенных микобактерий.
2. Кератоконъюнктивальная проба Шереня на морской свинке.
3. Определение вирулентности бактерий или силы токсина методом заражения
животных.
96
Задание для выполнения лабораторной работы
Занятие 1-е
1. Заразить белую мышь подкожно суточной бульонной культурой испытуемых
бактерий.
2. Посеять культуру стафилококка на среды для изучения факторов
патогенности.
3. Поставить дермонекротическую пробу.
4. Провести внутривенно иммунизацию кролика убитой вакциной для получения
имунной сыворотки (первое введение антигена).
Занятие 2-е
1. Произвести бактериологическое исследование трупов белых мышей, павших
после заражения. Определить присутствие возбудителя в органах и тканях,
отметить наличие капсул. Сделать заключение о форме инфекции и возможных
причинах гибели животного.
2. Отметить результаты посева стафилококка да питательные среды и сделать
соответствующее заключение.
3. Отметить результаты дермонекротической пробы на кролике.
4. Провести иммунизацию кролика убитой вакциной (второе введение
антигена).
Методические указания
Экспериментальное заражение животных. Инфекционный процесс может быть
искусственно воспроизведен путем заражения лабораторных животных;
кроликов, морских свинок, белых мышей, белых крыс и др. Экспериментальное
заражение животных производится для: 1) изучения патогенности и
вирулентности микроорганизмов; 2) выделения чистой культуры возбудителя
из различных материалов (метод биопробы); 3) воспроизведения
экспериментальной инфекции, испытания лечебного действия
химиотерапевтических препаратов и других целей.
Заражают животных накожно, внутрикожно, подкожно, внутримышечно,
внутривенно, перорально, интраназально, внутритрахеально,
интрацеребрально и внутрибрюшинно. Перед началом опыта животных отбирают,
взвешивают и маркируют. Мышь при заражении берут за хвост, опускают на
стол, туловище быстро прижимают к столу двумя пальцами и, скользя ими по
спине, захватывают кожу над головой; животное фиксируют в левой руке в
растянутом положении. Взвесь микробов определенной концентрации набирают
в шприц через иглу. Шприц держат, как писчее перо, в правой руке.
При подкожном заражении иглой прокалывают кожную складку на спине или у
корня хвоста и медленно вводят содержимое шприца под кожу. Затем иглу
быстро извлекают, прикрыв место инъекции ватой, смоченной спиртом.
5-639
97
Рис. 46. Внутрибрюшинное заражение белой мыши.
При внутрибрюшинном заражении животное фиксируют головой вниз, чтобы
кишечник переместился к диафрагме. В левой нижней трети живота делают
прокол кожи, удерживая иглу под острым углом, затем переводят шприц в
положение, перпендикулярное к брюшной стенке, толчкообразным движением
прокалывают брюшину и вводят содержимое шприца (рис. 46).
Инструменты стерилизуют кипячением.
Бактериологическое исследование трупов белых мышей.
Для обнаружения микроба, вызвавшего гибель животного, определения его
локализации в организме и выделения чистой культуры возбудителя
производят вскрытие зараженного животного сразу после его гибели,
соблюдая правила асептики во избежание загрязнения посторонними
бактериями. Мышь помещают брюшком кверху на марлю, смоченную
дезинфицирующим раствором, поверх слоя застывшего парафина в ванночке и
прикрепляют булавками за лапки. Тщательно обрабатывают кожу раствором
какого-либо антисептика. Вскрытие производят стерильными инструментами
Делают продольный разрез кожи по прямой линии от нижней челюсти до лобка,
осторожно отсепаровывают в стороны. Отмечают состояние подкожной
клетчатки и лимфатических узлов; при необходимости из них делают мазки-
отпечатки и посевы.
Г рудную полость вскрывают поперечным разрезом под мечевидным отростком и
двумя продольными разрезами через ребра параллельно грудине. Откладывают
вырезанный лоскут и осматривают органы грудной полости, отмечая в
протоколе наличие экссудата (рис. 47). Для посева крови из сердца его
98
Рис. 47. Вскрытие мыши. 1-4 этапы вскрытия.
поверхность прижигают раскаленным кончиком пинцета и вводят капилляр
стерильной пастеровской пипеткой в полость сердца. Затем каплю крови из
