Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
93
вие кишечных палочек, сальмонелл, бактерий рода Proteus и клостридий. Для
проведения этих исследований из продукта готовят 20% взвесь в
изотоническом растворе хлорида натрия, которую высевают на различные
питательные среды. Для определения микробного числа исследуемую взвесь
(неразведенную и разведенную в 2 раза) в количестве 0,5 мл вносят в
стерильную чашку Петри, заливают расплавленным и охлажденным питательным
агаром. Посевы инкубируют при 37°С в течение 48 ч, после чего
подсчитывают количество выросших колоний.
Присутствие Е. coii устанавливают по их способности сбраживать лактозу до
кислоты и газа при 43°С в течение 24 ч. Исследуемую взвесь (i г продукта)
засевают в среду Кесслера, после чего из нее делают высев на среду Эндо.
Из характерных для этих бактерий красных колоний готовят мазки,
окрашивают по Граму и микроскопируют.
Для выделения сальмонелл взвесь засевают на соответствующие элективные
среды, после чего выделяют чистые культуры бактерий и идентифицируют их
по методике, принятой для изучения этих бактерий (см. с. 183).
Бактерии рода Proteus выявляют по методу Шукевича. Для этого взвесь
вносят в конденсационную воду свежескошенного питательного агара. Посев
инкубируют при 37°С в течение суток. При наличии протея наблюдается
ползучий рост. При этом в мазках определяются грамотрицательные палочки.
Для обнаружения анаэробных, спорообразующих бактерий делают посев в две
пробирки со средой Китта-Тароцци; одну из них после посева нагревают в
течение 20 мин при 80°С для уничтожения вегетативных клеток. Посевы
инкубируют при 37°С в течение 5 сут. При появлении роста готовят мазки,
окрашивают по Граму и микроскопируют. Кроме того, проверяют способность
выделенных бактерий восстанавливать сульфит натрия в сульфат. Для этого
их засевают в среду Вильсона- Блера, где анаэробы образуют черные колонии
за счет выпадения черного осадка сульфата железа, образующегося в
результате соединения сульфата натрия с хлорным железом, содержащимся в
среде.
Колбасные изделия и продукты из мяса не должны содержать кишечных
палочек, сальмонелл, бактерий рода Proteus и анаэробных спорообразующих
бактерий. Общее количество бактерий в 1 г не должно превышать 1000.
Санитарно-бактериологическое исследование
консервов
При исследовании консервов определяют присутствие аэробных и анаэробных
бактерий. По эпидемиологическим показаниям
94
выявляют Cl. botulinum и проводят исследование на наличие ботулинического
токсина. Перед бактериологическим исследованием консервную банку
проверяют на герметичность в сосуде с горячей водой, ставят контроль на
бомбаж, выдерживая в термостате при 37°С в течение 5 сут, после чего моют
теплой водой, высушивают, протирают спиртом и обжигают верхнюю крышку
смоченной спиртом горящей ватой. Извлеченное содержимое засевают для
выявления аэробной флоры в две пробирки с бульоном, а для обнаружения
анаэробной флоры -в две пробирки со средой Китта-Тароцци, содержащей
0,15% агара. Посевы инкубируют при 37°С в течение 5 сут. При появлении
признаков роста аэробные бактерии пересевают на питательный агар, среду
Эндо, скошенный агар (по Шукевичу) и на питательный агар с 1% глюкозой.
Из среды Китта-Тароцци берут 1-2 мл, вносят в чашки Петри и заливают
расплавленным и охлажденным до 45-48°С питательным агаром с 1% глюкозы.
После застывания на поверхность среды помещают стерильное предметное
стекло (для создания анаэробных условий) и посевы инкубируют в течение
суток при 37°С. Из выросших колоний получают чистые культуры, которые
затем идентифицируют по обычной схеме.
Для выявления ботулинического токсина исследуемые пробы консервов
фильтруют и с фильтратом ставят реакцию нейтрализации токсина
антитоксической противоботулинической сывороткой типов А, В, С, Е, F на
белых мышах. В консервах не допускается присутствие Cl. botulinum и его
токсина, С1. perfringens и других патогенных бактерий.
Присутствие аэробной неспорообразующей флоры указывает на недостаточную
эффективность примененных методов консервирования и возможность порчи.
Присутствие сапрофитных аэробных бацилл (Вас. subtilis, Вас.
mesentericus) является допустимым при герметичности и отсутствии бомбажа
консервных банок.
ПРИКЛАДНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
В данном разделе изложены основные методы изучения тесно взаимосвязанных
процессов инфекции и иммунитета. Характер их взаимосвязи определяется
биологическими свойствами микроба и состоянием иммунной системы организма
хозяина. Студенты должны последовательно ознакомиться с методами оценки
вирулентности и токсичности патогенных бактерий, диагностическими
возможностями экспериментального заражения и вскрытия лабораторных
животных. Из иммунологических методов исследования выборочно представлены
некоторые методики изучения факторов естественного иммунитета:
фагоцитоза, комплемента в связи с оценкой иммунологического статуса
организма человека и выявлением иммуно-дефицитных состояний. С целью
