Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
/ мл.
и того же антибиотика, можно установить наименьшую дозу препарата, к
которой чувствительна исследуемая бактериальная культура.
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных
разведений. Данным методом определяют минимальную концентрацию
антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале
готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию
антибиотика (в мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном
растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме
1 мл), после чего к каждому разведению добавляют ОД мл исследуемой
бактериальной суспензии, содержащей 106 -107 бактериальных клеток в 1 мл.
В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и ОД мл суспензии бактерий
(контроль культуры). Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня, после
чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая
с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой
указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий содержащейся в
ней минимальной ингибирующей дозой антибиотика (табл. 7).
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных
разведений в питательном агаре. Данный метод определения минимальной
ингибирующей концентрации антибиотика более точен, чем предыдущий.
Готовят двукратные разведения антибиотика, после чего к 1 ч. каждого
разведения добавляют 9 ч. питательного агара, расплавленного и
остуженного до 45° С. Смесь хорошо перемешивают в пробирке и выливают в
чашку Петри. Приготовленные таким образом
77
чашки, каждая из которых содержит определенную концентрацию антибиотика,
делят на 20 секторов так же, как при фаготипировании стафилококка. На
агаровую поверхность каждого сектора петлей засевают суточную бульонную
культуру исследуемой бактериальной культуры. Посевы инкубируют при
оптимальной температуре до появления роста в контрольной чашке, не
содержащей антибиотика, после чего учитывают результаты. Минимальная
ингибирующая концентрация антибиотика "определяется по видимой задержке
роста бактерий по сравнению с контролем на чашке, содержащей наименьшее
количество данного препарата.
Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма
человека. В штатив устанавливают два ряда пробирок. В одном из них
готовят разведения эталонного антибиотика, в другом-исследуемой жидкости.
Затем в каждую пробирку вносят взвесь тест-бактерий, приготовленную в
среде Гисса с глюкозой. При определении в исследуемой жидкости
пенициллина, тетрациклинов, эритромицина в качестве тест-бактерий
используют стандартный штамм Staph, aureus, а при определении
стрептомицина-Е. coii. После инкубирования посевов при 37°С в течение 18-
20 ч отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию
индикатором вследствие расщепления глюкозы тест-бактерйями. Концентрация
антибиотика определяется умножением наибольшего разведения исследуемой
жидкости, задерживающей рост тест-бактерий, на минимальную концентрацию
эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий.
Например, если максимальное разведение исследуемой жидкости,
задерживающее рост тест-бактерий, равно 1:1024, а минимальная
концентрация эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-
бактерий, - 0,313 мкг/мл, то произведение 1024-0,313 =320 мкг/мл
составляет концентрацию антибиотика в 1 мл.
Определение способности Staph, aureus продуцировать |3-лак-тамазу. В
колбу с 0,5 мл суточной бульонной культуры стандартного штамма
стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного
и охлажденного до 45° С питательного агара, перемешивают и выливают в
чашку Петри. После застывания агара, в центр чашки на поверхность среды
помещают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают
исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня, после
чего отмечают результаты опыта. О способности исследуемых бактерий
продуцировать Р-лактамазу судят по наличию роста стандартного штамма
стафилококка вокруг той или другой исследуемой культуры до самого диска.
78
МИКРООРГАНИЗМЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ И САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИХ
ОБНАРУЖЕНИЯ
Микроорганизмы широко распространены в воздухе, воде, почве и окружающих
предметах, а также находятся в организме человека и животных. Патогенные
микробы, обитающие в организме больных и бактерионосителей, попадают в
окружающую среду и циркулируют в ней в течение определённого времени.
Заражение окружающей среды делает ее фактором передачи инфекций, хотя она
и не является средой обитания для патогенных микроорганизмов, так как они
в ней не размножаются.
В данный раздел включены две темы. Одна из них, посвященная микрофлоре
организма человека и методам, позволяющим установить качественные и
количественные изменения в ее составе, рассчитана на студентов всех
факультетов медицинских институтов. Другая тема посвящена санитарно-
