Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 77

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 71 72 73 74 75 76 < 77 > 78 79 80 81 82 83 .. 279 >> Следующая

некоторые другие.
У.1.2. КЛАССИФИКАЦИЯ ФЕРМЕНТОВ
Известно свыше 1000 различных ферментов. Согласно классификации
Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации
ферментов их разделяют на шесть классов [332]:
1. Оксидоредуктазы - окислительно-восстановительные ферменты.
2. Трансферазы - ферменты, катализирующие перенос различных групп атомов
с одной молекулы на другую.
3. Гидролазы - ферменты, катализирующие гидролитические реакции.
4. Лиазы - ферменты, которые отщепляют от субстрата ту или иную группу
(не путем гидролиза) с образованием двойной связи или, наоборот,
присоединяют группы к двойным связям.
5. Изомеразы - ферменты, катализирующие изомеризацию органических
соединений.
6. Лигазы, или синтетазы,- ферменты, которые катализируют синтетические
реакции, сопровождающиеся отщеплением остатков фосфорной кислоты от АТФ
или аналогичного трифосфата.
Каждый их этих классов подразделяется на подклассы, а последние в свою
очередь на более мелкие группы.
V.I.3. ЕДИНИЦЫ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ
Любой ферментный препарат прежде всего характеризуется ферментативной
активностью. По рекомендации комиссии Международного биохимического союза
по номенклатуре и классификации ферментов единицей ферментативной
активности принята стандартная единица фермента [332].
Стандартная единица фермента (Е): количество фермента, которое
катализирует превращение 1 мкмоля субстрата за 1 мин при заданных
условиях. Как правило, в качестве таких условий выбирают оптимум pH,
избыток субстрата (с тем, чтобы фермент был насыщен) и определенную
температуру (20 или 37° С). Активность фермента желательно определять на
начальной стадии катализа. Если известна начальная скорость
ферментативной реакции и, следовательно, активность фермента, можно
рассчитать и удельную активность фермента или ферментного препарата.
Удельная активность: число единиц фермента, отнесенное к 1 мг белка.
Молярная активность: число молекул данного субстрата или эквивалентов
затронутых групп, превращаемых за 1 мин одной молекулой фермента (или в
пересчете на активный центр) при оптимальной концентрации субстрата.
166
V.1.4. СКОРОСТЬ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ РЕАКЦИЙ
Присутствие фермента обнаруживают либо по накоплению продуктов данной
ферментативной реакции, либо по исчезновению субстрата. Об активности
ферментов судят по скорости этих процессов. Поэтому измерение скорости
ферментативных реакций является важной составной частью исследования
ферментов [132,
236, 436, 441, 464].
V.1.4.1. ЗАВИСИМОСТЬ СКОРОСТИ от ВРЕМЕНИ
Скорость большинства ферментативных реакций, как правило, уменьшается со
временем (рис. 81). Это уменьшение может быть обусловлено ингибирующим
действием продуктов реакции на фермент; уменьшением концентрации
субстрата по мере протекания реакции; инактивацией фермента нестабильными
условиями опыта (температурой, pH и т. д.). Поэтому обычно измеряют
начальные скорости ферментативных реакций, когда влияние упомянутых выше
факторов минимально. Важнейшими факторами, влияющими на скорость
ферментативных реакций, являются температура и концентрация водородных
ионов.
V.1.4.2. ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ
Повышение температуры в определенных пределах ускоряет ферментативные
реакции, увеличивая реакционную способность реагентов" т. е. скорость
превращения субстрата. Поскольку ферменты являются белками и
денатурируются при нагревании выше определенной температуры, дальнейшее
увеличение температуры вызывает инактивацию фермента и как следствие -
уменьшение скорости катализа.
V.1.4.3. ВЛИЯНИЕ pH
Каталитические свойства ферментов тесно связаны с pH среды и в
большинстве случаев максимальная активность фермента проявляется при
определенном значении pH. Стабильность ферментов также зависит от pH.
Существуют оптимумы активности и стабильности pH. При значениях pH,
отличающихся от оптимальных, ферменты, которые как все белковые вещества
содержат заряженные радикалы, диссоциируют. Изменение заряда белка почти
всегда сопровождается изменением структуры и пространственного
расположения полипептидных цепей; если эти изменения затрагивают область
активного центра фермента, то изменяются его каталитические свойства и
соответственно скорость ферментативной реакции.
Рис. 81. Типичная крттвая хода ферментативной реакции.
167
V.I.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНСТАНТЫ МИХАЭЛИСА [132, 236, 436, 441, 464]
Одной из важнейших характеристик ферментов является константа Михаэлиса.
Концентрация субстрата - один из факторов, определяющих скорость
ферментативной реакции. Почти во всех случаях начальная скорость
ферментативной реакции непосредственно зависит от концентрации субстрата
(рис. 82). Эта зависимость описывается
Рис. 82. Зависимость скорости (v) ферментативной реакции от концентрации
субстрата (5).
Рис. 83. Графическое определение константы Михаэлиса.
Рис. 84. Графическое определение константы Михаэлиса методом двойных
обратных величин Лайнуивера - Берка.
уравнением * Михаэлиса - Ментен v =t>max/(l + Km/S), где v - скорость
Предыдущая << 1 .. 71 72 73 74 75 76 < 77 > 78 79 80 81 82 83 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed