Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
крышку с каплями питательной среды и ставят в термостат при температуре
26-28° С. Возможны различные модификации условий микрокультуры: изменение
состава среды, внешних факторов и т. п. При изучении разных факторов
роста гриба в микрокультуре (среды и т. п.) капли на крышке нумеруют или
помечают каким-либо другим способом [59].
IV.4.7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РОСТА ПО ОБЪЕМУ
И ЧИСЛУ КЛЕТОК
Рост спор при прорастании определяют по увеличению объема. Готовят взвесь
определенной навески спор в определенном объеме воды или питательной
среды и подсчитывают в счетной камере их количество в единице объема с
последующим пересчетом на общее содержание в навеске или весовой единице
(в миллиграммах). Затем взвесь центрифугируют в градуированных пробирках
и определяют объем навески до прорастания. По разнице объемов навески
спор до и после прорастания определяют увеличение их биомассы, а при
пересчете на одну спору - увеличение ее объема во время набухания (с
соответствующей Поправкой на число проросших спор).
IV.4.8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ
СПОРООБРАЗОВАНИЯ
Интенсивность спорообразования (т. е. увеличение числа клеток) при росте
гриба на плотной среде определяют в счетной камере или в нескольких полях
зрения микроскопа по количеству спор в определенном объеме взвеси. Для
этого блок агаровой культуры определенной площади помещают в определенный
объем физиологического раствора или жидкой среды и в течение нескольких
минут встряхивают на качалке для освобождения спор и перехода их во
взвесь. Блоки агаровой культуры можно брать лабораторным сверлом. При
росте гриба в чашках Петри, например, блоки вырезают вдоль линии окруж-
146
ности. В этом случае определяют интенсивность спорообразования в
зависимости от возраста гриба. При взятии блоков вдоль линий окружности
на разных расстояниях от центра роста культуры выясняют влияние степени
истощения субстрата и других условий на спорообразование [110].
При поверхностном или погруженном культивировании в жидкой питательной
среде интенсивность спорообразования определяют по количеству конидий в
определенном объеме культуральной жидкости. Пробу культуры, помещенную в
жидкую среду, встряхивают на аппарате в течение 15-30 мин и
центрифугируют. Время осаждения спор зависит от вида гриба и определяется
экспериментально. Из определенной навески осадка спор готовят взвесь и в
счетной камере подсчитывают число спор в единице объема.
Густоту взвеси можно измерить нефелометрическим методом, который
отличается быстротой и удобен для микробиологических исследований,
особенно немицелиального роста грибов. Иногда для этой цели применяют
электронные счетчики. ,
IV.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОСИНТЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГРИБОВ
Биосинтетическую активность грибов определяют для характеристики фаз
роста гриба при разных способах культивирования, исследования влияния
состава субстрата и других факторов на рост культуры и активность
образования определенных метаболитов [51, 52].
Показателями биосинтетической активности грибов могут служить их биомасса
и синтез продуктов первичного и вторичного метаболизма, определение
которого осуществляют различными биохимическими методами. Однако рост
мицелия не всегда прямо коррелирует с биосинтетической активностью; в
некоторых случаях отмечается обратная зависимость. Наиболее четкая прямая
корреляция прослеживается по содержанию белка, НК, активности дыхания,
потреблению продуктов питания, выделению метаболитов и ферментов.
IV.5.1. НЕКОТОРЫЕ МАТЕМАТИЧЕСКИЕ МОДЕЛИ РОСТА
И БИОСИНТЕЗА
Скорость роста грибов определяют по увеличению биомассы в единицу времени
или по времени, необходимому для удвоения числа клеток. Скорость роста
грибов может быть выражена временем образования новой апикальной клетки
гифы и ее ветвления или временем образования новых клеток из посевной
конидии при дрожжеподобном типе роста или спорообразовании.
На скорость роста влияют внешние факторы, изменение внутриклеточной
организации и активность ферментных систем. Специфическая (удельная или
относительная) скорость роста определяется приростом биомассы в единицу
времени, рассчитанным на единицу растущей биомассы: ц = (dx/dt)(l/x), где
х - биомасса; t - время.
Скорость роста многих видов бактерий и дрожжей определяется концентрацией
компонента питательного субстрата, находящегося в минимуме (все остальные
компоненты - в избытке), и может быть выражена уравнением Моно,
отражающем зависимость скорости ферментативных реакций от концентрации
субстрата [710]: р = р S/(/C5 +
147
+ 5), где S - концентрация вещества, находящегося в минимуме; И'шах -
предельная скорость, которая может быть достигнута при увеличении S; Ks -
константа, численно равная концентрации S при
удельной скорости, равной fimax (рис. 78). Другой тип зависимости
роста от концентрации ингибирующих рост продуктов метаболизма выражается
уравнением неконкурентного торможения ферментативных
Рис. 78. Зависимость скорости роста бактерий от концентрации
