Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
30 мин. После добавления перекиси бензоила раствор полимеризуется при
комнатной температуре, но этот процесс длится несколько суток. Поэтому
обычно полимеризацию проводят в термостатах при температуре 45- 60° С в
течение 12-18 ч. Последовательность заливки объектов: после обезвоживания
сливают последнюю порцию спирта и в тот же сосуд добавляют смесь для
полимеризации - сначала пропитывают чистыми метакрилатами, затем
метакрилатами с перекисью бензоила и меняют эти растворы каждые 30 мин.
После этого объекты помещают в желатиновые капсулы № 1 или 2 (диаметрами1
5 или 6,5 мм), доверху наполненные смесью метакрилатов с перекисью
бензоила. Капсулы закрывают крышками, помещают в стойки и ставят в
термостат. После окончания полимеризации капсулы извлекают из термостата,
с них снимают крышки, верхние части блоков отрезают лезвием и
выбрасывают, так как они обычно плохо полимеризованы. На блоках делают
необходимые надписи специальными чернилами (2 г танина, 30 мл воды, 1 г
фуксина и 30 мл 36%-ного спирта), складывают и микротоми-руют.
11.3.2.6. МЕТОД ОТПЕЧАТКОВ ПФИСТЕРЕРА
На предметное стекло наносят каплю стерильной воды, вносят в нее соскоб
из спороношений с незначительным количеством спор и оставляют на 3-5 ч
для набухания (препараты некоторых видов грибов помещают в термостат).
После испарения воды препарат подсушивают на воздухе, лучше всего на
батарее, но не на пламени, так как в этом случае можно пережечь
содержимое спор. На пластинки ацетобути-рата толщиной не больше 0,2 мм,
вымоченные в смеси 70%-ного спирта и ацетона (10 : 3), переносят
разбухшие и подсушенные споры и прессуют их в течение 1-3 мин до полного
высыхания пластинки. Помещают пластинку со спорами в струю воды и
осторожно промывают мягкой кисточкой. Пластинку подсушивают и напыляют
кварцем перпендикулярно
104
ее плоскости, покрывают слоем растопленного парафина толщиной 1 мм для
предохранения препарата от повреждения при отмывании ацетобутирата. Затем
растворяют ацетобутиратозую пластинку в метил ацетате так, чтобы остался
только участок с отпечатками спор, покрытый кварцем и парафином. Парафин
растворяют в толуоле до полного исчезновения. Кварцевый отпечаток, даже
если он разломан, переносят на сетки, подтеняют металлом, как обычно, и
просматривают.
11.3.3. ИЗУЧЕНИЕ ГРИБОВ В ТКАНЯХ РАСТЕНИЙ
Вырезают фрагмент листа или другого органа растения, поврежденного
грибом, толщиной не более 1 мм2 и помещают в пробирку или маленький бюкс
с фиксирующей жидкостью (обычно 5%-ный водный раствор ТХУ). Это быстрый
фиксатор, поэтому сразу можно приступать к промыванию дистиллированной
водой, меняя ее трижды в течение часа. Промытые кусочки ткани переносят
для обезвоживания последовательно в 70-, 95- и 100%-ный спирт и
выдерживают в каждом из них до 1 ч. Спирт наливают в широкие бюксы с
крышками, а материал помещают в стеклянные цилиндрики с дном из ткани,
которые переносят из бюкса в бюкс. После обезвоживания препарат переносят
в смесь абсолютного спирта и метакрилатов (1 : 1) на 1 ч, а затем в смесь
бу-тилметакрилата и метилметакрилата (4 : 1) с добавлением 1%-ного
раствора перекиси бензоила. Далее все выполняют по методике, описанной в
разделе И.3.2.5.
III. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ
МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ГРИБОВ
111.1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Культивирование (выращивание) микроскопических грибов в зависимости от
целей и методов исследования включает ряд этапов. Так, при изучении
распространения грибов разных таксономических групп с учетом их
морфологии и физиологии необходимо: 1) подготовить образцы естественных
субстратов (почву, солому, подстилку, зерно и т. д.), из которых
предполагается сделать высев на обычные (сусловый агар) и элективные,
обеспечивающие преимущественное развитие одного вида или группы
родственных видов, среды для определения наличия грибов и характера их
роста; 2) выделить и получить чистые культуры грибов на плотных
питательных средах; 3) пересеять чистые культуры на дифференциально-
диагностические среды для последующего определения их видовой
принадлежности.
Культивирование микроскопических грибов с целью накопления биомассы или
определенных продуктов метаболизма предполагает:
1) наличие чистой высокопродуктивной культуры; 2) подготовку
стандартного посевного материала; 3) определение условий, необходимых для
роста грибов и проявления их биосинтетической активности; 4) выбор
условий ферментации, аппаратурного оформления, контроля ферментации,
подготовку и стерилизацию питательных сред.
111.2. УСЛОВИЯ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ РОСТА ГРИБОВ
. Для роста грибов и проявления их биосинтетической активности необходимы
источники питания - углерод, азот, водород, неорганические соединения,
содержащие калий, натрий, фосфор, магний, кальций, серу и железо;
микроэлементы - марганец, цинк, молибден, кобальт, медь, бор и др.;
стимуляторы роста; оптимальные температура, влажность, степень аэрации,
освещение и другие факторы. Источниками питания могут быть природные
