Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
сульфата натрия. Полученный раствор сульфата приливают к раствору
фуксина, охлажденному до 25° С, или 1 г основного фуксина для
фуксинсернистой кислоты растворяют в 200 мл кипящей дистиллированной воды
и охлаждают до 50° С" фильтруют и добавляют 20 мл 1 н. соляной кислоты,
охлаждают до 25° С и добавляют 1 г метабисульфита натрия или калия.
Реактив хранят на холоду в широкой склянке с притертой пробкой. Реактив
считается пригодным, пока* он сохраняет запах сернистого газа и цвет
бледного чая (розовая окраска является признаком непригодности).
Препарат промывают по 15-20 мин в трех порциях сернистых вод и затем в
дистиллированной воде. Способ приготовления сернистых вод: 1) к 200 мл
дистиллированной воды добавляют 4 мл концентрированной соляной кислоты;
отдельно в 25 мл дистиллированной воды растворяют 4 г безводного или 8 г
кристаллического сульфата натрия, приливают этот раствор к подкисленной
воде, взбалтывают и дают отстояться или 2) 0,5 г метабисульфита натрия
или калия, 5 мл 1 н. НС1 помещают в колбу и доводят объем раствора до 100
мл дистиллированной водой. Для получения более контрастных препаратов их
докрашивают 0,1-0,2%-ным раствором, лучше слабоподкисленным, светлого
зеленого или водного голубого (вассерблау). Препарат промывают водой,
высушивают, проводят через ряд спиртов восходящей концентрации до
абсолютного, ксилол и помещают в бальзам. Ядер-ные элементы окрашиваются
в красно-фиолетовый цвет, протоплазма при докрашивании приобретает
зеленый оттенок. Лучше всего окрашиваются конидии несовершенных грибов.
Трехцветное окрашивание по Флеммингу (модификация для грибов). Препарат
фиксируют любым способом, помещают на 5-12 ч в 1%-ный раствор сафранина,
который готовят смешиванием 1%-ного раствора водорастворимого сафранина и
воды (1 : 1); промывают в воде, затем в спирте, снова трехкратно в воде
по 15 мин, затем помещают в 2%-ный водный раствор генцианового
фиолетового на 30 мин, промывают водой и помещают в 1%-ный водный раствор
оранжа на 1-3 мин, после чего промывают в гвоздичном масле. Протоплазма
окрашивается в розовый цвет, ахроматиновые элементы клетчатки - в
фиолетовый, хромати-новые структуры - в красный.
Окрашивание гематоксилином Делафильда. Препарат фиксируют 35-50%-ным
спиртом и помещают в краситель, для изготовления которого 1 г
гематоксилина растворяют в 6 мл абсолютного спирта и этот раствор вливают
по каплям в 100 мл насыщенного водного раствора аммонийных квасцов и
оставляют стоять в течение недели, затем прибавляют по 25 мл глицерина и
метилового спирта и фильтруют через 4 ч. Время окрашивания 3-30 мин.
Препарат промывают в нескольких сменах воды 5-30 мин. Для дифференциации
структур клетки к воде или спирту добавляют соляную кислоту (1 капля на
100 мл воды); после чего промывают 70%-ным спиртом и водой. Ядра
окрашиваются в красный цвет, протоплазма - в фиолетовый.
Окрашивание гематоксилином и эозином (или эритрозином). Препарат
окрашивают гематоксилином Делафильда и дифференцируют подкисленным
спиртом. Срезы обт^рдста погружают в 1%-ный спирто-
86
вой раствор эозина (или эритрозина) на 1-2 мин, проводят через крепкие
спирты, промывают как обычно. Ядро и клетчатка окрашиваются в пурпурный
цвет, протоплазма - в розовый. Особенно хорошо окрашиваются ржавчинные
грибы.
Окрашивание борным кармином. Применяется при изучении ядер, хромосом и т.
д. В 100 мл воды, нагретой до 50° С, растворяют 4 г буры, добавляют 3 г
кармина, а потом доливают 100 мл 70%-ного спирта и фильтруют. Препарат
фиксируют любым способом, промывают, обезвоживают до 50% проводкой через
спирты, погружают в краситель
Рис. 47. Ядра в конидиях Fusarium sambucinum var. trichothecioides,
окрашенные методом HCl-Гимза (а); люминесцентный вариант окраски по
Фёльгену с аурамином 00 (б); ядра в макроконидиях Fusarium solani,
окрашенные методом HCl-Гимза (б).
на 1-3 дня, промывают 70%-ным спиртом, подкисленным 1-2 каплями соляной
кислоты, 2-3 дня.
Окрашивание ацетокармином. Нефиксированный препарат помещают в краситель,
приготовленный следующим образом: насыщают кармином 45%-ный (по объему)
водный раствор уксусной кислоты при температуре кипения; после остывания,
отстаивания и фильтрации на каждые 100 мл раствора прибавляют 1-2 капли
1-5%-ного раствора уксуснокислого железа. Время окрашивания - 1-24 ч.
Окрашивание пикрокармином. Препарат фиксируют спиртом, промывают водой и
помещают в краситель, приготовленный следующим образом: 1 г кармина
растворяют в 50 мл воды с 50 мл крепкого аммиака, добавляют 50 мл
насыщенного раствора пикриновой кислоты и оставляют в растворе красителя
на 2-3 дня, затем фильтруют. Кармины окрашивают ядра в яркий розовый
цвет.
Окрашивание методом НС1 -Гимза. Особенно хорошо окрашиваются ядра в гифах
несовершенных грибов (рис. 47, а, в). Препарат фиксируют метиловым
спиртом, смесью спирта с формалином или жидкостью Карнуа по следующей
схеме: фиксация жидкости Карнуа 10 мин; промывка в 96%-ном спирте;
