Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
20% -ного водного раствора танина. Время окрашивания 20-30 мин.
2. Метод Гутштейна. Препарат фиксируют на предметном стекле над пламенем
горелки, помещают на 20-30 мин в 5%-ный раствор танина, промывают водой
1-5 мин и окрашивают карболфуксином (фуксин, карболовая кислота, спирт,
вода - 1 : 5 : 10 : 100) в течение 1-2 мин; тщательно промывают. Оболочка
окрашивается в интенсивно красный цвет.
3. Метод Кнейси. Препарат фиксируют на предметном стекле над пламенем
горелки и помещают в раствор, состоящий из 70 мл насыщенного водного
раствора калийных квасцов и 30 мл 20%-ного водного раствора танина на 2-3
мин. Промывают дистиллированной водой
3-5 тиин, добавляют каплю карболфуксина и накрывают покровным стеклом, не
удаляя краски. Оболочка окрашивается в синий цвет.
4. Метод Пешкова. Применяют для дрожжей и низших грибов. Препарат
фиксируют в жидкости Карнуа и опускают на 2-5 мин в 10%-ный водный
раствор танина, тщательно промывают и красят фуксином Пфейфера в течение
30-60 с, не промывая микроскопируют. Оболочки окрашиваются в синеватые
цвета [352].
5. Окрашивание генциановым фиолетовым и конго красным. Применяют для всех
грибов. Препарат фиксируют любым способом, помещают в 0,5%-ный водный
раствор генцианового фиолетового на 1,5-2 мин, промывают, помещают в
0,5%-ный водный раствор конго красного
84
на 2-3 мин, промывают, подсушивают. Оболочки окрашиваются в темно-синий
или черный цвет.
Окрашивание целлюлозы. 1. Реактив Швейцера. Применяют для всех видов
грибов. 20 г хлорцинкйода растворяют в воде, добавляют
6,5 г йодистого калия и после его растворения 1,3 г металлического
йода. Объем раствора доводят до 10 мл дистиллированной водой. Реактив
держат в темной посуде. Целлюлоза окрашивается в сине-фиолетовый цвет.
2. Флороглюцин. Готовят насыщенный раствор флороглюцина в воде, который
добавляют по капле под покровное стекло, или же готовят препарат
непосредственно на нем. Прибавляют каплю соляной кислоты. Целлюлоза
окрашивается в интенсивный фиолетовый цвет или темно-винно-красный.
Окрашивание лигнина. Препарат фиксируют над пламенем горелки на
предметном стекле, добавляют туда же несколько капель 1%-ного
сернокислого анилина. Лигнин окрашивается в золотисто-желтый цвет.
Окрашивание пектиновых веществ. Препарат фиксируют на предметном стекле
над пламенем горелки и добавляют несколько капель 0,5%-ного раствора
сафранина в 0,6%-ной уксусной кислоте. Пектиновые вещества окрашиваются в
оранжевый цвет.
Окрашивание хитиновых веществ. Метод Висселинга. Препарат кипятят в
концентрированной щелочи в течение часа, промывают, нейтрализуют серной
кислотой до получения нейтральной реакции. Затем добавляют две капли
раствора йода в йодистом калии и несколько капель разведенной серной
кислоты. Хитин окрашивается в ярко-фиолетовый цвет.
Определение хитина и хитозана в мицелии. Отфильтрованный мицелий помещают
в аппарат Сокслета для удаления жира эфиром и, если надо, пигмента.
Пигмент удаляют спирто-бензолом (1 : 4), затем отмывают до полного
исчезновения спирто-бензола, заливают 4- 5%-ным едким натром и кипятят в
водяной бане 3-4 ч, после чего проверяют на белок биуретовой реакцией (к
5-6 мл раствора добавляют такое же количество 10%-ного раствора щелочи и
хорошо взбалтывают, после чего добавляют 2-3 капли 3%-ного раствора
сернокислой медн и слабо нагревают; белок окрашивается в фиолетовый
цвет). Если реакция отрицательна, то мицелий отмывают от щелочи до
нейтральной реакции и обрабатывают 50%-ным едким натром при 140°С в
течение 1-2 ч. Проверяют наличие хитозана качественной реакцией со слабым
раствором йода; хитозан окрашивается в фиолетовый цвет. Далее препарат
заливают 1-2%-ной уксусной кислотой, в которой хитозан растворяется.
После окончательного растворения хитозана, о чем судят по исчезновению
фиолетовой окраски, остается хитин, который окрашивается слабым раствором
йода в интенсивный коричневый цвет. Для количественного определения
полученный материал заливают абсолютным спиртом на 2-3 ч, высушивают в
вакууме при 40° С и гидролизуют концентрированной соляной кислотой. Затем
определяют количество редуцирующих сахаров (методом Хагедорна - Иенсена).
Окрашивание ядерного аппарата. Метод Фёльгена (реакция на ДНК). Препарат
фиксируют жидкостью Карнуа в течение 10-30 мин, промывают 80%-ным спиртом
и проводят через нисходящие концентрации спиртов. Реакция проявляется
только в гидролизованном материале. Последовательность гидролиза:
препарат помещают на 2- Змин в 1 н. раствор соляной кислоты при комнатной
температуре, за-
85
тем на 5-б мин в 1 н. раствор соляной кислоты, нагретой до 60° С, и снова
в первый раствор на 1-2 мин, затем помещают в реактив Шиффа на 2-3 ч.
Реактив Шиффа готовят следующим образом: 0,5 г основного фуксина
растворяют в 90 мл кипящей дистиллированной воды, охлаждают до 50° С,
фильтруют и прибавляют 2 мл концентрированной соляной кислоты. Отдельно в
10 мл холодной воды растворяют 2 г безводного или 4 г кристаллического
