Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
объектмикрометра. Эту операцию повторяют несколько раз. Все полученные
данные записывают в две колонки. Обычно стараются отметить возможно
большее количество совпадения делений и измеряют их 5-10 раз в
зависимости от однородности получаемых данных. Потом для каждого
измерения производят расчет следующим образом: умножают количество
делений объектмш/ро-метра на 10 мкм (поскольку каждое деление
объектмикрометра равно 10 мкм) и делят произведение на количество делений
окулярмикрометра. Таким образом находят значение одного деления
окулярмикрометра. Из каждой пары значений вычисляют среднее. Например,
допустим, что при определенном увеличении 50 делений окулярмикрометра
совпадают с 20 делениями объектмикрометра. В этом случае вся длина шкалы
окулярмикрометра составляет 20 X 10 = 200 мкм. Это число делят и находят
цену одного деления - 4 мкм.
Размер исследуемого объекта определяют умножением числа делений
окулярмикрометра, которым соответствует длина или ширина объекта, на
значение одного деления в микронах. Например, длина конидии составляет 5
делений. Умножаем это число на цену одного деления - 4 мкм. В этом случае
абсолютная длина конидий равна 20 мкм. Однократное измерение длины (или
ширины) не дает представления о действительном размере, поэтому
необходимо проводить несколько измерений, а затем вычислять среднее и
искать ошибку методом вариационной статистики [233, 386, 431].
Для удобства работы обычно составляют табличку, на которой приведены
значения деления окулярмикрометра для всех возможных оптических
комбинаций и результаты умножения их величин на ряд последовательных
чисел до 20 или более. При работе с рисовальным аппаратом пользуются еще
и другой шкалой. Для изготовления ее в микроскоп вместо предметного
стекла помещают объектмикрометр и с помощью рисовального аппарата
срисовывают его деления или часть их на бумагу, которую помещают точно на
расстоянии 250 мм от окуляра. Такой рисунок изготовляют для всех
увеличений, например для объектива X 10, X 40 со всеми имеющимися
окулярами и т. д. Эти данные наносят на четыре стороны прямоугольной
картонной карточки, которая в дальнейшем служит для измерения объектов.
Для проведения измерений таким способом объект помещают на столик
микроскопа, а карточку со шкалой - на бумагу под рисовальным прибором.
Совмещая изображения, определяют размеры объекта. В тех случаях, когда
есть рисунок, выполненный с помощью такой же оптической системы
(объектива и окуляра), измерение деталей его проводят так: располагают
рисунок строго на расстоянии 250 мм от окуляра,
79
помещают на тубус микроскопа рисовальный аппарат, а на столик микроскопа
- объектмикрометр и, добившись требуемой четкости изображения, измеряют
объект в единицах объектмикрометра. В этом случае получают абсолютные
значения величин без пересчетов.
При измерении объекта окулярмикрометром в объективе Гюйгенса его помещают
между обеими линзами на поверхности диафрагмы, ограничивающей место
действительного изображения. Поскольку окулярмикрометр рассматривается
только одной линзой (находящейся ближе к глазу), точность измерения
относительна. Поэтому для получения точных измерений, пользуются
окулярами Рамсдена.
11.1.3. ПОДГОТОВКА МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЙ
В СВЕТОВОМ МИКРОСКОПЕ
11.1.3.1. ПОДСЧЕТ конидий
Обработка конидий для подсчета. Для подсчета количества конидий, не
смачивающихся водой, рекомендуется подготовить их следующим образом: в
пробирку со стерильным смывом конидий добавляют этиловый эфир из расчета
0,03-0,04 мл (3-4 капли при диаметре пипетки 1 мм) на 5 мл жидкости.
Полученную смесь тщательно взбалтывают И оставляют на 30-40 мин. Пробирки
закрывают не очень плотно, чтобы эфир мог испаряться. За это время
жировой слой оболочки конидий, обусловливающий несмачиваемость,
растворяется, конидии оседают, но при взбалтывании равномерно
распределяются в толще жидкости. Подготовленные таким способом конидии
удобно считать в счетной камере, а данные этих подсчетов можно
использовать при построении калибровочной кривой для конидий каждого
исследуемого вида грибов и определять их количество в 1 мл жидкости с
помощью ФЭКа [214, 342].
Счетная камера. Для точного подсчета количества конидий или других
элементов, взвешенных в жидкости, применяют счетную камеру. Она
представляет собой толстое предметное стекло, на котором вышлифована
пластинка, поверхность которой на 0,1 мм ниже поверхности стекла. На
пластинке выгравированы взаимноперпендикулярные линии, расстояние между
которыми равно 50 мкм, т. е. стороны квадратов, образуемых пересечением
этих линий, равны 50 мкм, или г/20 мм. Если в камеру помещают жидкость,
то каждый квадрат рассматривают как основание прямоугольной призмы со
стороной Ч20 и высотой 0,1 мм. Объем такой "жидкой" призмы равен 1/4 000
мм. При исследовании взвеси спор подсчитывают количество спор или конидий
в единице жидкости, а затем и во всей жидкости, если объем ее известен.
