Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
2% агара, кипятят в течение 30 мин, фильтруют через марлю и вату и
разливают в пробирки. Стерилизуют при 110° С 20 мин.
Кукурузная среда: смесь 45 г кукурузной муки в 1000 мл воды подогревают в
течение часа при 60° С на водяной бане, добавляют 15 г агара и кипятят до
растворения, затем фильтруют через марлю и вату, разливают в пробирки.
Стерилизуют при 120° С 30 мин.
Дрожжевая вода: 80 г прессованных или 20 г сухих пивных или пекарских
дрожжей кипятят 15-20 мин в 1000 мл воды, фильтруют после охлаждения
через бумажный фильтр, разливают в пробирки и кол бы. Стерилизуют при
120° С 15 мин.
Среда Курунга: 1 г картофельного крахмала; 100 мл дистиллированной воды;
150 мл яичной смеси. Применяют для хранения патогенных форм грибов. Воду
с крахмалом прогревают на горелке до сгущения смеси, автоклавируют при
115° С 15 мин. Яичную смесь из 100 мл желтков и 50 мл цельных яиц
встряхивают со стеклянными шариками и добавляют к стерильному
картофельному крахмалу; разливают по стерильным пробиркам и оставляют в
наклонном положении в течение часа при 90° С для свертывания. Яйца берут
свежие с объемом содержимого 50 мл, из которых 15 мл приходится на желток
[149, 199, 201, 401].
485
Приложение 8 (см. раздел XVIII.9.). Основные питательные среды для
культивирования фитопатогенных грибов
Ломтики картофеля: промытые и очищенные от кожицы клубни картофеля
разрезают на кубики и помещают в пробирки, стерилизуют текучим паром в.
течение 3 дней.
Зерно риса: 2 г риса + 6 мл воды помещают в пробирку стерилизуют таким же
образом, как и предыдущую среду.
Стебли люпина: кусочки стебля + 3-6 мл воды помещают в пробирку,
стерилизуют при давлении 1 атм 30 мин.
Семена конопли: разрезанные на две половинки семена помещают в воду,
стерилизуют текучим паром 3 дня; наиболее распространенная среда для
культивирования.
Агар на отваре из овсяной муки: 100 г муки кипятят в 1 л воды на водяной
бане в течение часа при 60° С, фильтруют, добавляют 3% агара, стерилизуют
при 1 атм.
Агар на отваре из кукурузной муки: 20 г кукурузной муки кипятят в 1 л
воды в течение 1 ч, фильтруют, добавляют 20 г агара, стерилизуют при
давлении 0,5 атм 15 мин. Добавляя к среде 20 г глюкозы и 20 г пептона,
можно усилить рост мицелия. В среде без добавок преобладает спороношение.
Солодовый агар: 20-50 г концентрата ячменного сусла и 20 г агара
растворяют в 1 л воды; стерилизуют при 0,5 атм 15 мин.
Яблочный агар: 200 г протертых яблок кипятят в 1 л воды, отфильтровывают,
добавляют 2-3% агара.
Среды из отваров разных субстратов можно готовить на основе минеральной
части среды Чапека.
Среды для культивирования облигатных фитопатогенных грибов. Срезанные
листья или их отрезки в растворах кинетина (10 мг/л) или бензимидазола
(40 мг/л) длительное время могут сохраняться в нормальном состоянии,
реагировать на заражение паразитными грибами, причем особенности
проявления заболевания аналогичны с наблюдаемыми при испытании на целом
растении. Отрезки листьев проростков пшеницы помещают на поверхность
раствора в чашки Петри, заражают напылением смеси уредоспор с тальком на
поверхность листьев и выдерживают в камере при температуре 10-12° С и 18-
часовом периоде освещения. На проростках пшеницы спороношение, например,
Puccinia striiformis f. tricini наступает через 10-14 дней; на листьях
ячменя спороношение Erysiphe graminis f. hordei - на 7-й день; на листьях
винограда этим способом получают спороношение Plasmopara viticola [210].
Пептонно-глюкозная среда с добавлением бенгальского розового и
стрептомицина для выделения из почвы видов Pythium (г): 1 К2НР04; 0,5
MgS04; 5 пептона; 10 глюкозы; 20 агара; 1 л дистиллированной воды; 30 мг
стрептомицина или 2 мг ауреомицина. К каждому литру среды добавляют 10 мл
раствора бенгальского розового (1 : 300). После стерилизации при давлении
1 атм в течение 30 мин и охлаждении до 45- 60° С добавляют антибиотики.
Среда ограничивает развитие быстрорастущих грибов и подавляет рост
бактерий и актиномицетов.
Среда для культивирования Phytophthora infestans (мг): 40 г К2НР04; 20
NaN03; 15 СаС12; 15 MgC03; 10 Na2S04; 2 FeS04; 20 янтарной кислоты; 60 D-
или Z^-аспарагиновой кислоты; 40 L-глютаминовой кислоты; 20 аланина; 20
глицина, 10 НС1-цистеина; 5-10 г тиамина; 1,5 г сахарозы; 1 л
дистиллированной воды. Стерилизуют при давлении 0,25 атм 30 мин.
Начальное значение pH 5-5,2. Твердую среду получают, до-
486
бавляя 1,5-2% агара. Для усиления роста можно добавить измельченные
кусочки клубней картофеля или экстракт из семян ржи, который готовят
автоклавированием 100 г семян ржи в 1 л воды при 2 атм в течение 30-40
мин.
Факультативные виды фитопатогенных грибов культивируют на среде Чапека
или Ролена - Тома.
Среда Леониана (г): 1,25 К2НР04; 0,625 MgS04; 0,625 пептона; 6,25
мальтозы; 6,25 солодовой вытяжки; 20 агара; 1 л дистиллированной воды.
Применяют для исследования плодоношения грибов и формирования плодовых
тел. Рекомендуется для грибов, образующих перитеции или пикниды.
