Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 236

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 230 231 232 233 234 235 < 236 > 237 238 239 240 241 242 .. 279 >> Следующая

интервалом до 24 ч. После второй стерилизации в пробирки с пшеном
добавляют 60-70% стерильной водопроводной воды и стерилизуют еще раз.
Сразу после последней стерилизации пробирки с пшеном следует встряхнуть,
чтобы при охлаждении не образовались комки. Засевают культуру 1 мл
суспензии в стерильной водопроводной воде конидий гриба, выращиваемого на
косяках сусло-агара в течение 2 нед, или спорами либо конидиями 2-
недельного возраста, которые снимают с поверхности колоний. Пробирки и
флаконы встряхивают для равномерного распределения конидий. Культуры
465.
выращивают при оптимальной для них температуре до получения спороношения.
Выращенную культуру высушивают в вакуум-аппарате при 24-25° С в течение
2-3 сут. Абсолютная влажность после сушки не должна превышать 6-8%. По
окончании сушки пробирки и флаконы парафинируют и хранят при комнатной
температуре. Аналогичным образом хранят культуры грибов на просе и других
сортах зерна. Этот метод пригоден также для получения посевного материала
(инокулюма). Срок годности культур в этом случае 1 год [241, 325].
ХХ.2.2.2. ХРАНЕНИЕ В СТЕРИЛЬНОЙ ПОЧВЕ
Садовую почву тщательно просевают через мелкое сито, переносят по 5 г в
пробирки и ежедневно в течение 3 дней стерилизуют в автоклаве в течение
30 мин при давлении 1,51 • 105 Па. Споры и мицелий культуры, растущей на
агаре Чапека или сусло-агаре, снимают петлей и в несколько приемов
переносят в пробирку со стерильной почвой. Ватные пробки в пробирках
обрезают вровень с пробиркой и заливают парафином. Пробирки заворачивают
в бумагу и хранят при комнатной температуре [427]. Метод более пригоден
для хранения многих культур, в частности видов родов Penicillium,
Aspergillus, Fusarium, Mucorales, некоторых патогенных форм, чем хранение
под вазелиновым маслом. Процент выживаемости спор достаточно высок через
5 и даже 7- 10 лет [427, 504, 582, 609].
ХХ.2.2.3. ХРАНЕНИЕ В КВАРЦЕВОМ ПЕСКЕ
Речной песок промывают в проточной воде 5-6 ч, прокаливают 0,5 ч для
удаления органических примесей, охлаждают и просевают сквозь мелкое сито.
Просеянный песок насыпают в стеклянные ампулы и дважды стерилизуют при
120° С в течение часа. Споры 2-недельного возраста снимают петлей с
поверхности колоний, выращенных на косяках агара, и в несколько приемов
переносят в ампулы с песком, которые закрывают ватными пробками. Ампулы
со споровым материалом подсушивают в термостате при 37° С 2-3 сут,
заливают ватные пробки парафином и хранят при комнатной температуре. Этот
метод достаточно эффективен для хранения видов родов Aspergillus и
Penicillum, однако некоторые виды Penicillum при этом теряют способность
образовывать склероции [241].
ХХ.2.3. ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР В ВЫСУШЕННОМ СОСТОЯНИИ
Известно много случаев выживания культур на естественно высохших
субстратах (Aspergillus, Penicillium и др.). При хранении культур на
агаризованной среде в высохшем состоянии отмечается утрата сумчатого
спороношения и способности образовывать склероции у некоторых пенициллов
и аспергиллов [241, 410, 430]. Культуры Stachy-botrys alternans,
сохранявшегося на фильтровальной бумаге в высушенном состоянии при
комнатной температуре, сохраняли морфологические, физиологические и
токсические свойства в течение 15 лет [444]. Преднамеренное высушивание
также нашло широкое применение в микологической практике. Длительное
время на пшене без изменения антибактериальной активности хранится
продуцент пенициллина Penicillium chrysogenum [225, 241]. Самым надежным
ме-
466
тодом хранения Pen. vitale - продуцента глюкозооксидазы и каталазы -
является хранение на просе [325]. Наряду с преднамеренным высушиванием на
естественных субстратах давно используют искусственное медленное (при
подогреве) или быстрое (под вакуумом) высушивание суспензии спор.
Субстратом для высушивания суспензий может служить фильтровальная бумага,
кусочки травы, силикагель. В качестве суспензионной среды используют
обезжиренное молоко. Выживаемость культур выше при быстром высушивании и
медленном насыщении влагой при восстановлении.
ХХ.2.3.1. ХРАНЕНИЕ НА БЕЗВОДНОМ СИЛИКАГЕЛЕ (МЕТОД ПЕРКИНСА)
Споры или мицелий, суспендированные в снятом молоке, адсорбируют на
безводный силикагель, который хранят при соответствующих температурах.
Ампулы или пробирки (13 X 100 мм) до половины наполняют безводным
силикагелем. Силикагель содержит красящее вещество - индикатор на
влажность, которая губительна для культур при хранении. Ампулы
стерилизуют сухим жаром при 180° С 1,5 ч и хранят в плотно
запломбированных контейнерах. Для приготовления суспензии спор используют
культуры 5-дневного возраста, выращенные на сусло-агаре. С этой целью 0,5
мл смыва суспензии конидий или мицелия с одного косяка агара переносят в
пробирку или ампулу с силикагелем. Частички силикагеля пропитываются
полностью, но через 12 ч становятся поверхностно сухими и легко
рассыпаются при встряхивании. Выдержанные неделю образцы проверяют на
выживаемость. Для этого на подготовленный косяк агара вытряхивают
Предыдущая << 1 .. 230 231 232 233 234 235 < 236 > 237 238 239 240 241 242 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed