Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
кизила, падуба, тикового дерева, тюльпанного дерева, бальзы и совсем не
спороносят на древесине кипариса болотного, красного дерева,
442
дуба красного и др. Общая тенденция, отмеченная у сумчатых и
несовершенных морских грибов, заключается в том, что они лучше
развиваются на мягкой древесине. Плотная древесина, устойчивая против
гнилей, вызываемых наземными грибами, мало пригодна для развития морских
сумчатых и несовершенных грибов [636].
После извлечения панелей из морской воды они возможно скорее должны быть
доставлены в лабораторию для обработки. В специальных водонепроницаемых
полиэтиленовых мешках, куда их помещают сразу же после извлечения из
воды, панели можно держать не дольше одного дня [816].
XIX.2.3. ВЫДЕЛЕНИЕ И ПОЛУЧЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР
МОРСКИХ СУМЧАТЫХ И НЕСОВЕРШЕННЫХ
ГРИБОВ-САПРОФИТОВ, РАЗВИВАЮЩИХСЯ НА ДРЕВЕСИНЕ
XIX.2.3.1. ПРЕДВАРИТЕЛЬНАЯ ОБРАБОТКА ПАНЕЛЕЙ
Выделению чистых культур сумчатых и несовершенных грибов, уже развившихся
на панелях или блоках древесины, предшествует обработка панелей. Их
поверхность очищают тупым шпаклевочным ножом, освобождают от лишней воды,
тщательно промокая их стерильными бумажными тампонами, после чего
просматривают под лупой, отмечая местонахождение плодовых тел и
спорообразующих колоний стальными булавками. После предварительной
обработки некоторые исследователи считают целесообразным перед выделением
чистых культур грибов окончательно высушить панели [636] одним из двух
способов: панели помещают в предварительно простерилизованный эксикатор
на 24 ч, после чего древесину извлекают достаточно сухой для выделения
грибов или панели с плодовыми телами аскомицетов и спороносящими
колониями несовершенных грибов помещают перед потоком теплого воздуха,
создаваемым компрессором. Второй способ более рационален при обработке
массового материала. Поток воздуха предварительно пропускают через трубку
с СаС12, а затем через трубку со стерильной ватой; панели помещают на
расстоянии около 30 см от 13-миллиметрового отверстия трубки; за 2-3 ч их
поверхность подсыхает вполне достаточно. При таком подсушивании панелей
(а в полевых условиях иногда даже просто перед вентилятором) не
наблюдалось случаев загрязнения панелей грибами из воздуха. По мнению
ряда исследователей [704, 816], для выделения чистых культур панели после
предварительной обработки не следует высушивать, а нужно поместить во
влажную камеру на 3-4 нед при 20° С, хотя в каждом конкретном случае срок
инкубации в камере определяется исходным состоянием панели и скоростью, с
которой на ней развивается основная и сопутствующая микофлора. Однако
такая инкубация, по мнению С. Мейерса и Е. Рейнольдса, позволяет
установить полный состав микофлоры панелей, поскольку сразу же после
извлечения из морской воды многие грибы дают на панелях только
мицелиальный рост без спороношения, которое образуется лишь при
последующей инкубации. В течение инкубационного периода панели несколько
раз просматривают под микроскопом или лупой для выявления новых
развивающихся грибов.
Т. Джонсон с сотр. [636] предлагает иную конструкцию инкубационной камеры
для деревянных панелей (10 X 15 X 2 см). Ее можно изготовить из двух
прямоугольных чашек (21-25 см) из пирексового стекла. Дно одной чашки
выстилают 4-6 слоями фильтровальной
443
бумаги для ликвидации лишней воды из панелей, вторая чашка служит
крышкой. Их связывают вместе, обертывают бумагой и стерилизуют. В каждый
инк/батор можно поместить две деревянные панели. Края чашек, в которые
уже поместили панели, склеивают прозрачной лентой, и ставят камеру в
термостат при 20° С. В таких условиях достаточно 7-14 дней для развития
интенсивных спороношений сумчатых и несовершенных грибов на поверхности
инкубируемых панелей.
Минимальный срок погружения панелей в морскую воду для появления сумчатых
и несовершенных грибов - 12 дней летом и 20 - зимой. Но иногда в задачу
исследования входит выявление грибов, которые могут развиться на панелях
при более длительном погружении в морскую воду, например на 2 мес и более
(до 3 лет) [652]. Такие панели очень сильно обрастают различными морскими
организмами: водорослями, беспозвоночными; чистка их ножом не всегда
удаляет эти образования полностью. В таком случае отбирают наименее
обросшие панели, соскребают с них обрастания, тщательно промывают в
проточной, отфильтрованной морской воде и нейлоновой нитью связывают
такую панель с совершенно чистой панелью, простерилизован-ной окисью
пропилена или автоклавированием. Связанные панели погружают в танк (бак)
с проточной морской водой и содержат там
2-3 нед, после чего новую панель используют для выделения сумчатых и
несовершенных морских грибов в чистую культуру или же для инкубации перед
выделением.
XIX.2.3.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ГРИБОВ С ПАНЕЛЕЙ ДРЕВЕСИНЫ
НА ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
Сумчатые и несовершенные морские грибы-сапрофиты выделяют с панелей на
питательную среду следующим образом. Под микроскопом на панелях
