Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
Засеянные водно-почвенной суспензией чашки Петри периодически
просматривают, обычно начиная с третьих суток, и отдельные колонии грибов
в случае их интенсивного разрастания отвивают в пробирки на агаризованную
питательную среду. Окончательный учет проводят через 10-15 сут. При этом
подсчитывают общее число выросших колоний, условно допуская, что каждая
колония образовалась из одной споры или клетки гифы. Учет изолированных
грибных зародышей (спор, фрагментов гиф) изложен ниже.
Метод почвенных разведений Ваксмана удобен для характеристики грибной
флоры почв разных типов, почв различных растительных ассоциаций, изучения
влияния удобрений или других агротехнических мероприятий на видовой
состав грибов.
XIX.1.2.3. МЕТОД ПРЯМОГО ПОСЕВА ПОЧВЫ
Для выделения грибов методом прямого посева [825] небольшие образцы почвы
(0,005-0,015 г) берут из средней пробы стерильным ланцетом и смешивают с
каплей стерильной воды на дне чашки Петри. В эту же чашку добавляют 8-10
мл охлажденной агаризованной питательной среды и частицы почвы равномерно
распределяют по всей поверхности легким покачиванием чашки.
434
XIX.1.2.4. МЕТОД ПРЯМЫХ ОТПЕЧАТКОВ ПОЧВЕННОЙ ПРОБЫ
Край пенополиуретанового цилиндра длиной 40 мм и диаметром 15 мм
увлажняют агаризованной питательной средой, путем соприкосновения с ее
поверхностью [806]. Затем увлажненный край цилиндра прижимают к
подсушенному почвенному образцу и этим же краем делают 10
последовательных отпечатков на поверхности питательной среды в чашках
Петри, которые ставят в термостат для инкубации. Метод прямых отпечатков
почвенной пробы прост и легко выполним.
XIX.1.2.5. ЭЛЕКТРОСТАТИЧЕСКИЙ МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ГРИБОВ
Метод основан на способности диэлектриков притягивать положительно
заряженные мелкие частицы [227]. Для этого из фторопласта изготовляют
круглые пластинки диаметром 4 см, обрабатывают их антисептиком -
метиловым спиртом, избыток которого удаляют стерильной фильтровальной
бумагой. Подсушенные пластинки электризуют трением о стерильную
фильтровальную бумагу. Наэлектризованные пластинки подносят к
рассыпанному ровным слоем почвенному образцу не ближе 2-3 см, чтобы
избежать притяжения крупных частиц. Притянутые к пластинкам мельчайшие
частицы отпечатывают на агари-зованных средах в чашках Петри.
Электростатический метод дает возможность изолировать значительно большее
число видов грибов, чем метод почвенных разведений.
XIX.1.2.6. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ГРИБОВ НА РАСТИТЕЛЬНЫЕ ОСТАТКИ
Метод выращивания грибов в условиях, приближенных к естественным [264].
Измельченную стерню злаковых, головки цветков клевера и т. п. помещают в
чашки Петри на увлажненную фильтровальную бумагу и стерилизуют. Затем на
них высевают исследуемую почву и по мере появления колоний грибов
отвивают последние на питательные среды. Метод предусматривает
обнаружение в почвах многих медленнорастущих грибов, в том числе и
сумчатых.
XIX.1.2.7. МЕТОД ФУМИГАЦИИ ПОЧВЫ
Этим методом рекомендуют изолировать сумчатые грибы [826, 830]. Он
основан на применении веществ, обладающих значительной токсичностью и
летучестью - формалин, метилбромид, хлорпикрин и др. Пары указанных
ядохимикатов легко диффундируют в исследуемые образцы и вместе с тем
быстро могут быть удалены из них проветриванием. Просеянную через сито
почву помещают в стеклянную трубку, на поверхности которой имеется
несколько отверстий (рис. 129). В трубку вводят нужную дозу ядохимиката и
все отверстия закрывают резиновыми пробками, которые после нескольких
часов экспозиции заменяют ватными. Обработанную таким способом почву
высевают на агаризован-ную питательную среду. Дозировка ядохимиката и
экспозиция зависят
И й й tt И й а
Рис. 129. Стеклянная трубка с отверстиями, применяемая в методе фумигации
почвы.
435
главным образом от типа почвы и вида гриба. Например, виды Sorda-ria Ces.
et de Not. и Thielavia Zopf из песчаной почвы лучше всего выделяются при
обработке ее метилбромидом в концентрации 0,6 мл на 1000 мг почвы с
экспозицией 4 ч, а виды Chaetomium Kunze'ex Fr.- при концентрации 0,6-0,8
мл.
XIX.1.2.8. МЕТОД ТЕПЛОВОЙ ОБРАБОТКИ ПОЧВЫ
Сумчатые грибы можно выделять также методом тепловой обработки почвы
[827]. Образцы почв прогревают паром при 60-65° С в течение 30 мин,
помещают на агаризованную питательную среду непосредственно или выделяют
грибы методом почвенных разведений Ваксмана. Методы выделения
темноцветных гифомицетов посредством облучения УФ-лучами почвенной
суспензии [726] и грибов с крупными спорами посредством центрифугирования
почвы [723] трудоемки, требуют специального оборудования, ввиду чего ими
редко пользуются. Подробное описание указанных методов приведено в [299].
XIX.1.2.9. МЕТОД ПРИМАНКИ
Приманки применяют для обнаружения в почве видов, которые не изолируются
на питательные среды из-за угнетения их быстрорастущей флорой и выделения
некоторых экологических групп грибов. В качестве приманки используют
семена конопли, крылья насекомых, экскременты крыс, мышей, кроликов, рога
