Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 211

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 205 206 207 208 209 210 < 211 > 212 213 214 215 216 217 .. 279 >> Следующая

Учет потерь урожая от болезней [131] - недобор урожая вследствие
поражения растений той или иной болезнью. Потери выражают в процентах и
вычисляют по формуле G = (А - а) • 100/Л, где А - урожай здоровых
растений; а - урожай больных растений.
XVIII.7. ВЫДЕЛЕНИЕ ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ [131г 210, 299, 370, 470]
В большинстве случаев необходимы специальные методы выделения грибов,
связанные с особенностями их биологии и свойствами субстрата.
_ Поверхностную стерилизацию органов растения применяют для освобождения
от флоры, находящейся на их поверхности. Для стерилизации используют
сулему в разведении 1 : 1000 (исследуемый объект погружают в раствор на 1
-2 мин и затем многократно промывают водой), формалин в разведении 1 :
300 (объект погружают в раствор, а затем выдерживают в парах формалина в
течение 30 мин - 2ч); 0,1-1%-ную
423
бромную воду (исследуемый объект погружают в раствор на несколько
секунд); 3%-ную перекись водорода; 2%-ный раствор марганцевокислого калия
- (объект выдерживают в растворе в течение 1-5 мин и многократно
промывают стерильной водой). Выбор концентрации дезинфектора и экспозиции
зависит от целей исследования и характера исследуемого материала.
Для освобождения от посторонних организмов, главным образом от бактерий,
посевы исследуемых грибов и первичное выделение культур производят на
средах с pH 4,0 с добавлением в среду для посева антибиотиков с широким
спектром антибактериального действия (стрептомицин и др.).
Метод влажной камеры и его модификации применяют для выделения чистой
культуры гриба. В стерильные чашки Петри кладут 2-3 кружка стерильной
фильтровальной бумаги, увлажненные стерильной водой (реже жидкой
питательной средой). Исследуемый материал, чаще после поверхностной
дезинфекции, помещают в чашку и ставят в термостат при соответствующей
температуре. За ростом грибов наблюдают под бинокулярной лупой при 20-50-
кратном увеличении. При этом представляется возможным выделить из мицелия
гриба или его спороноше-ния чистую культуру и в ряде случаев при
микроскопировании определить его вид. Пользуясь методом влажных камер,
можно создавать различные условия влажности, а при исследовании материала
с достаточной влажностью, например плодов, зеленых частей растений,
клубней, наблюдать за ростом грибов, не увлажняя фильтровальную бумагу в
чашке Петри. Этим методом можно также дифференцированно исследовать
разные части изучаемого материала и выделять из них грибы, так как в
начальные периоды грибы растут гнездами, скученно и их выделение не
представляет затруднений.
XVIII.7.1. ВЫДЕЛЕНИЕ ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ
ИЗ РАЗНЫХ ОРГАНОВ РАСТЕНИЯ
XVIII.7.1.1. ВЫДЕЛЕНИЕ ИЗ КОРНЕЙ
Свежевыкопанные корни многократно промывают стерильной водой, отжимают в
нескольких слоях стерильной фильтровальной бумаги, отрезками длиной 1-3
см или целиком (у проростков) укладывают на кружки стерильной
фильтровальной бумаги в чашках Петри и ставят в термостат при температуре
26° С. Наблюдение за ростом грибов и их выделение производят через 24-48
ч и в последующие дни роста.
Относительную плотность заселения мицелия и численность грибов в
прикорневой почве определяют путем растирания определенной навески после
многократного смыва стерильной водой. Навеску свежевыделенных корней с
приставшими к ним частицами почвы помещают в колбочку со стерильной
водой, взбалтывают для освобождения корней от частиц почвы. После
многократного промывания водой корни вынимают микологическим крючком, а
взвесь почвенных частиц в воде фильтруют и взвешивают для определения
массы почвы, приставшей к корням. По разнице между первоначальной
навеской и массой почвы определяют массу корней. Смывы в определенном
разведении высевают на кислый сусловый агар для определения численности и
состава видов грибов в прикорневой почве. Растертые корни мерно высевают
на кислый сусловый агар, подсчитывают число колоний и выделяют культуры.
Плотность заселения определяют также на определенной поверхности.
424
XVI11.7.1.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ИЗ ПОРАЖЕННОЙ ТКАНИ
Скальпелем, прокаленным над пламенем горелки, делают срез поверхностной
ткани по направлению от здоровой части к пораженной. На границе больной и
здоровой ткани отрезают небольшой кусочек и переносят в пробирку с кислым
сусловым агаром.
XVIII.7.1.3. ВЫДЕЛЕНИЕ ИЗ СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ
Стебли и корни отмывают от почвы, стерилизуют поверхностно, прокаленным
скальпелем разрезают стебель поперек на расстоянии 5- 15 см от корневой
шейки и небольшой участок пораженного, побуревшего сосуда высевают на
поверхность кислого суслового агара; отдельные кусочки ткани помещают во
влажную камеру.
XVIII.7.1.4. ВЫДЕЛЕНИЕ ИЗ СТЕБЛЕЙ И ЛИСТЬЕВ
В ряде случаев грибы можно выделить не только из свежего материала, но и
из гербарных образцов. Необходимым условием при сборе для этих целей
является немедленная фиксация гербарного материала высушиванием, а также
предохранение от заражения посторонней микофлорой. Наиболее приемлемый
Предыдущая << 1 .. 205 206 207 208 209 210 < 211 > 212 213 214 215 216 217 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed