Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 206

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 200 201 202 203 204 205 < 206 > 207 208 209 210 211 212 .. 279 >> Следующая

сухом виде он сохраняется несколько лет без потери антигенной активности.
413
XVII.10.1.5. получение антигенов при обработке клеток
(3-НАФТОЛОМ [1491
Культуры гриба выращивают на плотной или жидкой среде, убивают кипячением
или автоклавированием, отмывают физиологическим раствором,
центрифугируют. Осадок подсушивают в термостате 2-3 ч или высушивают до
постоянной массы при 105° С в сушильном шкафу. После этого клетки
тщательно растирают в теплой (50° С) ступке в течение 30-40 мин со
спирто-водным раствором Р-нафтола, взятого из расчета 0,5 части на 1
часть клеток (до полного растворения Р-нафтола).
При получении антигена из сухих клеток последние следует размолоть на
шаровой мельнице, затем перенести в ступку с пестиком, смешать с Р-
нафтолом, после чего прилить дистиллированной воды (1:1 по отношению к р-
нафтолу), вновь тщательно размешать и добавлять этиловый спирт до
растворения Р-нафтола. Затем прилить теплую (50° С) дистиллированную воду
до получения 3%-ного раствора Р-нафтола и оставить смесь на сутки в
термостате при 37° С или при комнатной температуре. После этого смесь
следует отцентрифугировать. Надосадочную жидкость сливают и добавляют к
ней двукратный объем 96%-ного этилового спирта при последующем
подкислении (по каплям) 0,1 н. соляной кислотой до pH около 4-5. Выпавшие
в осадок хлопья полисахарида собирают центрифугированием, промывают
спиртом и эфиром, высушивают либо в вакуум-эксикаторе над серной
кислотой, либо в термостате при 37° С. Порошок растирают в стерильной
ступке и сохраняют в рефрижераторе при 4-5° С в течение нескольких лет.
XVII.10.1.6. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ УЛЬТРАЗВУКОВЫХ АНТИГЕНОВ
Для получения ультразвуковых (УЗ) антигенов используют взвесь из 30 мг
грибницы, собранной с плотных или жидких сред, 1 мл стерильной
дистиллированной воды. Взвесь обрабатывают ультразвуком при постоянном
охлаждении проточной водой в течение 2-3 ч. Ультразвуковую обработку
производят в специальных аппаратах при частоте волны 800 кГц и мощности
4,5-5 Вт/см2. Затем взвесь центрифугируют 30 мин при 6500 об/мин и
надосадочную опалесцирующую жидкость лио-филизируют. Полученный слегка
желтоватый, рыхлый порошок легко растворяется в воде и солевых растворах.
Выход антигена составляет в среднем 15% сухой массы озвученных клеток.
Пригодными для работы считаются антигены, дающие положительные реакции до
предельного титра соответствующих сывороток; отрицательные или слабо
положительные реакции в низких титрах с гетерологическими сыворотками
(против родственных грибов) и четко отрицательные реакции с нормальными
сыворотками и с физиологическим раствором.
XVII.10.2. МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ
ТКАНЕВЫХ ФОРМ НЕКОТОРЫХ ДИМОРФНЫХ ГРИБОВ
Метод основан на вшивании в организм мышей, белых крыс и кроликов
диффузионных камер, пропускающих жидкости организма, но задерживающих
клетки. В камерах создается оптимальная среда для роста и накопления
гриба в тканевой форме без примеси клеток хозяина. Камеры пригодны как
для быстро, так и для медленно растущих дрожжевых и мицелиальных грибов,
и позволяют наблюдать за их развитием в течение недель и месяцев.
414
Диффузионные камеры представляют собой пластмассовые кольца, заклеенные с
двух сторон миллипоровым фильтром (№ 1, 2, 3 - размер пор не более 0,7
мкм). Разработанный Р. А. Аравийским метод культивирования патогенных
грибов в диффузионных камерах оказался полезным для выяснения деталей
морфогенеза тканевых форм различных диморфных грибов, характеристики
особенностей их метаболизма, получения стадиоспецифичных антигенных
препаратов, а также для изучения взаимодействия лекарственных препаратов
на тканевые формы, выявления характерных изменений тканевых форм
патогенных грибов под влиянием лекарственных препаратов [7].
XVII.11. ВЫЯВЛЕНИЕ МИКОГЕННОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ
Для выявления микогенной сенсибилизации в качестве специфических
аллергенов применяют вакцины из убитых грибов, фильтраты, белковые или
полисахаридные извлечения жидких культур. Их широко используют в кожных
аллергических реакциях, выявляющих гиперчувствительность немедленного
(ГНТ) и замедленного (ГЗТ) типов, и в пробирочных реакциях:
лейкоцитолизе, бластрансфсрмации и др.
Для иммунотерапии микозов и десенсибилизации микогенной аллергии
применяют поливалентные вакцины (из нескольких штаммов грибов) и
автовакцины из культур, выделенных от самого больного. Густота вакцинных
взвесей в физиологическом растворе колеблется от 100 до 200 тыс. грибных
клеток, убитых прогреванием при 80° С в течение 2 ч на водяной бане и
консервированных добавлением фенола (до 0,25%). Необходимым требованием
для любых аллергенов является их стерильность, которая достигается
повторным прогреванием в водяной бане в течение 1 ч при 70-80° С.
Бесклеточные антигены и аллергены стерилизуют пропусканием через фильтры
Зейтца, воздействием УФ-лучей в кварцевой посуде. Полисахаридные
препараты стерилизуют прогреванием при 110° С в течение 20 мин в
Предыдущая << 1 .. 200 201 202 203 204 205 < 206 > 207 208 209 210 211 212 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed