Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 203

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 197 198 199 200 201 202 < 203 > 204 205 206 207 208 209 .. 279 >> Следующая

полисахаридной природы. Агар-агар тщательно промывают в течение 8-10 ч
проточной водопроводной водой, затем 4 сут дистиллированной водой,
сменяемой 2-3 раза в сутки. Затем готовят 2%-ный агар на дистиллированной
воде с добавлением бромфе-нолового синего (0,1 мг%) и 0,85% поваренной
соли. Раствор стерилизуют в автоклаве при 120° С в течение 30 мин,
разливают в чашки диаметром 6 см или чашки Петри диаметром 10,см. После
застывания агара в нем вырезают до дна отверстия с помощью пробочного
сверла диаметром 2-3 мм. Одно отверстие делают в центре и 4-б - по
периферии на расстоянии 0,8 см от центра. На дно углублений вносят по 1
капле расплавленного агара того же состава. После застывания среды чашки
подсушивают в термостате и в центральное углубление вносят 0,1 мл
испытуемой цельной или разведенной (1:2) сыворотки, а в периферические -
по 0,1 мл раствора антигена в разведении 1 : 100 - 1 : 500.
408
В течение 15 дней чашки выдерживают в строго горизонтальном положении при
4-6° С.
Количество, взаиморасположение и четкость преципитационных линий могут
быть различными; быстрота их выявления колеблется в широких пределах (от
нескольких часов до 5-7 дней). С гомологичными антигенами линии
преципитации выявляются быстрее, чем с гетероло-гичными, где они менее
выражены и расплывчаты. С антигенами из свежевыделенных штаммов
преципитационные линии получаются более четкими, чем с таковыми из
музейных культур.
XVII.9.6. РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК)
Антигенами служат растворимые полисахариды, белковые или комплексные
вытяжки из грибниц или культуральной жидкости соответствующих грибов.
Наиболее пригодными считаются антигены, полученные воздействием
ультразвука, или р-нафтольные препараты, слабее действуют фенольные и
спиртоводные вытяжки.
Для взаимодействия в реакции специфических компонентов (антигена и
антитела) необходим комплемент - термолабильное белковое вещество,
содержащееся в свежей сыворотке крови большинства млекопитающих.
Содержание комплемента в сыворотках животных и человека не постоянно,
избыток и недостаток его отражаются на точности результатов РСК. В связи
с этим испытуемые сыворотки предварительно прогревают на водяной бане при
58° С в течение 30 мин (для инактивации комплемента). Поэтому в реакцию
берется строго определенное количество комплемента, полученного из крови
морских свинок; его рабочая доза определяется титрованием перед каждой
постановкой РСК.
В положительных случаях соответствующие антитело и антиген
взаимодействуют с комплементом, но выпадающий при этом осадок остается
невидимым для глаза. Поэтому для выявления этого взаимодействия вводят
вторую индикаторную систему, которая не участвует в первой реакции, но
для взаимодействия компонентов которой также необходим комплемент. Эта
индикаторная система состоит из антигена (эритроциты барана) и антитела
(специально полученной "гемолитической" сыворотки кролика, растворяющей
эритроциты барана в присутствии комплемента).
В положительных случаях комплемент связывается первой системой и гемолиз
не наступает, реакция оценивается в Н-|-|-К При отрицательной РСК антиген
и антитело первой системы не взаимодействуют, комплемент остается не
связанным и участвует в индикаторной реакции между эритроцитами барана и
"гемолитической" сывороткой кролика. При этом в опытной пробирке
наблюдается гемолиз, реакция оценивается как отрицательная (-).
Постановка РСК сложна, требует строгой последовательности,
воспроизводимых условий реакции, использования определенных концентраций
ингредиентов, рабочие дозы которых (антигенов, сывороток, комплемента)
предварительно устанавливают перед каждой реакцией с учетом оптимальных
условий взаимодействия. Постановка РСК с грибковыми антигенами почти не
отличается от таковых при бактериальных и вирусных инфекциях, которые
проводятся соответственно требованиям специальных инструктивных
методических указаний М3 СССР.
С помощью РСК выявляют специфические антитела, характеризуют
иммунологические сдвиги в процессе болезни и выздоровления,
идентифицируют грибковые антигены, определяют соответствующих им
409
возбудителей грибковых заболеваний. При некоторых глубоких микозах, в
сочетании с результатами аллергических проб, РСК используют для оценки
тяжести микоза и прогноза исхода болезни.
XVII.9.7. РЕАКЦИЯ ИММУНОЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ
Для быстрой идентификации грибов в исследуемом материале используют
прямой и непрямой методы флуоресцирующих антител. Для этого мазки
мокроты, гноя, осадки мочи и желчи, спинномозговой жидкости, отпечатки
органов и тканей, вытяжки из почвы на обезжиренных стеклах подсушивают на
воздухе и фиксируют смесью Никифорова или раствором Дюбуа (20 мл
насыщенного раствора сулемы, 5 мл уксусной эссенции, 1 мл 38%-ного
раствора формалина). Затем препараты помещают в чашки Петри или кюветы в
условиях влажной камеры.
Если препараты окрашивают прямым методом, то на поверхность мазка наносят
Предыдущая << 1 .. 197 198 199 200 201 202 < 203 > 204 205 206 207 208 209 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed