Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 198

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 192 193 194 195 196 197 < 198 > 199 200 201 202 203 204 .. 279 >> Следующая

улавливания углекислого газа в пробирки помещают стеклянный поплавок
(стеклянную трубочку длиной 2-3 см) с запаянным верхним концом. Для
определения ферментативной активности посевы грибов выдерживают при 30-
35° С; результаты учитывают для дрожжеподобных грибов на 3-и сут, для
нитчатых на 2-3-ю нед.
В качестве питательной среды для построения ауксанограммы углеводов
используют (г): 1 фосфата калия; 0,5 сульфата магния; 2 промытого агара;
1000 мл дистиллированной воды; для построения ауксанограммы азота (г): 1
фосфата калия; 0,5 сульфата магния; 20 глюкозы;
400
2 промытого агара; 1000 мл дистиллированной воды. Навески агара в
марлевом мешке предварительно промывают в течение 2 ч проточной водой и
тщательно прополаскивают дистиллированной.
2 мл гомогенной взвеси чистых агаровых культур исследуемого гриба в
физиологическом растворе наносят на дно стерильной чашки Петри, заливают
расплавленной и охлажденной до 45° С агаровой средой, перемешивают
осторожным покачиванием чашки Петри перед застыванием. На поверхность
застывшей питательной среды наносят просте-рилизованные диски
фильтровальной бумаги диаметром 5-6 мм, предварительно пропитанные 20%-
ным раствором углеводов или исследуемых азотистых веществ и асептично
высушенные в термостате.
Образование крахмалоподобных веществ выявляют на среде следующего состава
(г): 1 сульфата аммония; 1 фосфата калия; 0,5 сульфата магния; 10
глюкозы; 200 мкг тиамина; 1000 мл дистиллированной воды; pH 4,5. К среде
добавляют 25 г промытого агара, растворяют в автоклаве, разливают в
пробирки и стерилизуют дробно при 100 С 3 дня подряд по 30 мин.
На скошенную поверхность питательной среды в пробирке засевают культуру
исследуемого гриба и через 10-15 дней на поверхность ее наносят несколько
капель раствора Люголя. При наличии крахмалоподобных веществ колония
окрашивается в темно-синий цвет.
Для построения ауксанограммы этанола используют среду, не содержащую
других источников углерода (г): 1 сульфата аммония; 1 фосфата калия; 0,5
сульфата магния; 1000 мл дистиллированной воды; время стерилизации - 1 ч
при 120° С. После охлаждения в среду добавляют не менее 3% этанола, 0,5%
дрожжевого экстракта и несколько капель смеси витаминов (200 мкг биотина,
400 мкг пантотената кальция, 400 мкг ниазина, 2000 мкг инозитола, 200 мкг
парааминобензойной кислоты, 400 мкг гидрохлоридпиридина, 400 мкг
солянокислого тиамина). Отсутствие роста грибов в контрольной пробирке
без этанола, при наличии колоний в опытных пробирках с этанолом,
указывает на усвоение его исследуемой культурой.
Уреазную активность грибов изучают на среде Сеелигера и Литтма-
на,'приготовленной следующим образом: 1) 28 г мочевины растворяют в 100
мл дистиллированной воды и стерилизуют через фильтр Зейтца;
2) к 900 мл воды добавляется 1 г пептона, 6 г хлористого натрия, 2 г
монофосфата калия и 15 г агара; смесь кипятят до растворения агара;
3) к охлажденной до 55° С среде добавляют раствор мочевины и б мл
красного фенола в разведении 1 : 500 (0,2 красного фенола, 10 мл слегка
подогретого 96%-ного этанола при последующем добавлении 90 мл слегка
подогретой дистиллированной воды); на поверхность среды, асептически
разлитой в пробирки, засевают исследуемую культуру гриба. Выращивают при
25-30° С. Результаты учитывают через 2-3 сут для дрожжеподобных грибов,
через 10-12 ддя нитчатых. При разложении мочевины среда окрашивается в
розовый цвет [149, 200].
XVI1.7.2.1. ВЫРАЩИВАНИЕ ДЕРМАТОФИТОВ НА ВОЛОСАХ ПО ВЕНБРЕЙЗЕГХЕМУ
Здоровые волосы длиной 10-15 см прикрепляют коллодием к верхней части
стеклянной трубочки, нижняя часть которой изогнутая в виде треугольника,
служит ей основанием. Едва заметный комочек колонии осторожным
прикосновением наносят на середину волоска, после чего трубочку помещают
в небольшой стеклянный цилиндр с крышкой, на дне которого находится
стерильная вода для предохранения
401
посевов от высыхания, и выращивают при 25° С в течение 10-15 дней и
больше. Инфицированные участки волосков исследуют в капле щелочи или
лактофенола.
Выращивание грибов на стерильных волосах позволяет изучить
кератинолитическую активность дерматофитов и своеобразных клиновидных
морфологических структур, служащих для внедрения соответствующих грибов в
волосы.
XVII.7.2.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЕРАТИНОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ
ГРИБОВ
Кератинолитическую активность грибов определяют путем взвешивания
небольших блоков кератина до и после заражения их соответствующими
культурами грибов (по Гейтманеку) или же по характеру вызываемых грибами
повреждений в волосе и количеству перфорационных органов.
XVII.8. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ЗАРАЖЕНИЕ ЖИВОТНЫХ ГРИБАМИ
Методы экспериментального заражения и серологического исследования
инфицированного организма для выявления специфических антигенов и антител
являются основными этапами изучения развития инфекционного процесса. На
них основано изучение свойств возбудителей грибных заболеваний, их
патогенности и взаимного родства, выявления специфических защитных
Предыдущая << 1 .. 192 193 194 195 196 197 < 198 > 199 200 201 202 203 204 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed