Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
золотистым хомячкам (по 0,2 мл) и кроликам (по 0,3-0,4 мл).
Для получения чистых культур рекомендуется использовать посевы тонко
размельченного или асептично разведенного патологического материала;
возможно большее количество агаровых сред в пробирках или чашках Петри на
одну пробу исследуемого материала; проводить пассажи загрязненного
бактериями посевного материала через кислые среды (pH 2-3), в которых
отмирает бактериальная флора.
Бактериальное загрязнение посевов устраняют с помощью антибиотиков
(пенициллина, стрептомицина, хлоромицетина) в смеси или отдельно,
обрабатывая ими патологический материал и добавляя к соответствующим
питательным субстратам. Для приготовления смеси из антибиотиков берут
5000 ед. пенициллина, 5000 мкг стрептомицина на 1 мл физиологического
раствора. Смесь хранят в холодильнике. Хлоромицетин используется в
концентрации 500 мкг/мл. По мере надобности
395
2 капли смеси наносят на косяки агара. Антибиотики легко диффундируют,
создавая концентрацию около 50 ед. в 1 мл среды. Актидион (циклогексимид)
в концентрации 500 мкг/мл плотной среды предохраняет посевы от заражения
банальными видами грибов. Антибиотик термостабилен, его можно добавлять к
горячей питательной среде. Из других бактерицидных средств используют
теллурит калия (0,015%-ный), сульфат меди (0,05%-ный), кристалл-виолет
(0,01 %-ный); добавление к питательным средам фурацилина (1 : 50 000) и
зет-фурана (1 : 100 000) задерживает развитие бактерий и актиномицетов.
Медленно растущие патогенные грибы рекомендуют выращивать во влажной
камере, в эксикаторе, под стеклянным колпаком в тарелках с комочком
стерильной ваты или марли, периодически увлажняемых водой.
Для выявления патогенных грибов в испражнениях их исследуют после
разведения физиологическим раствором с антибиотиками в соотношении 1 :
10. 5-6 комочков испражнений диаметром 0,5 мм берут с поверхности и из
глубины, из передней и задней частей уплотненных испражнений и делают
взвесь в физиологическом растворе с антибиотиками (1 : 100). Взвесь
наносят по 0,05-0,1 мл на плотные питательные среды и осторожно растирают
стеклянным шпателем по поверхности. Результаты учитывают количественно с
пересчетом выявленных грибов на 1 г исследуемого материала и оценивают
при сопоставлении с результатами повторных исследований.
Возбудителей кокцидиоидоза, гистоплазмоза выделяют из почвы с помощью
заражения животных. Для этого навески почвы помещают в физиологический
раствор с антибиотиками в соотношении 1 : 5- 1 : 10 (масса : объем),
встряхивают в течение 2 ч или оставляют на 24 ч при 37° С, после чего
заражают восприимчивых животных посредством подкожной или внутрибрюшной
инъекции. Животных убивают через 3-4 нед. Селезенку, печень, легкие
используют для выделения чистых культур грибов.
XVII.5. ВЫДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ МИКОЗОВ ИЗ ПОЧВЫ
XVII.5.1. ВЫДЕЛЕНИЕ ДЕРМАТОФИТОВ
Образцы почвы обычно из 10 точек исследуемого участка помещают в
широкогорлые стеклянные стерильные банки емкостью 500 мл, накрытые
половинкой чашки Петри. Почву берут с глубины 5-6 см металлическим
шпателем, лопаточкой или крышкой от чашки Петри, высыпают в стеклянную
банку, встряхивают для гомогенизации и насыпают слоем 3-5 мм на дно
стерильных чашек Петри, увлажняют небольшим количеством (5-6 мм)
стерильной воды. На поверхность почвы равномерно раскладывают детские или
конские волосы, предварительно нарезанные отрезками длиной 2-3 см и
автоклавированные при 120 С в течение 20 мин. Завернутые в бумагу чашки
Петри сохраняют в темном месте при 20-25° С в течение 3-4 нед.
В положительных пробах на волосах развиваются бархатисто-мучнистые
колонии кератинофильных грибов с беловатыми зернами клей-стотеций
(половые формы грибов) размером 0,5-1 мм. Для освобождения волосков от
комочков земли их рекомендуется проводить по поверхности агаризованной
воды (4%-ной) в чашках Петри, меняя чашки для каждой пробы, и после этого
высевать их на косяки агара Сабуро или сусло в пробирках [201].
XVII.5.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БЛАСТОМИКОЗОВ
Для выделения возбудителей бластомикозов навеску почвы (5-10 г)
обрабатывают 30%-ным раствором хлористого натрия, взвесь отстаивают в
течение 3-4 ч, надосадочную жидкость разводят в 1,5-2 раза стерильной
водой, центрифугируют, осадок обрабатывают раствором антибиотиков,
высевают на питательные среды и используют для заражения восприимчивых
животных. Для непосредственного выделения возбудителей респираторных
микозов из почвы используют восприимчивых мышей, помещая их на 7 дней в
сосуд, содержащий размельченную почву. Мышей убивают через 4 нед, из
печени, селезенки, легких делают посевы для получения культур и
последующего их определения [203].
Получение одноклеточных культур. Маленький комочек чистой культуры гриба
основательно размешивают в стерильном физиологическом растворе.
Последовательно разводят в ряде пробирок, содержащих
2-3 мл жидкого сусла, до более тонкой взвеси и последнюю пробирку на 3-5
