Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
кровеносной системы), а также микогенные сепсисы с распространением
грибов по всему организму [200].
По течению микозы подразделяют на острые (недели!) и хронические (годы и
десятилетия!), легкие и тяжелые, одиночные и эпидемические, а также особо
опасные - эндемические, поражающие почти всех соприкасающихся с их
возбудителями [203]. При некоторых микозах закономерны повторные приступы
(рецидивы), развитие повышенной чувствительности (сенсибилизация) и
продолжительное носитель-ство грибов у переболевших.
Клинические проявления микозов весьма разнообразны. Некоторые из них
напоминают бактериальные, особенно туберкулез, и вирусные инфекции,
хронические протозойные болезни, злокачественные заболевания крови и
опухоли [199]. Вероятность развития грибковых заболеваний возрастает в
связи с существованием большой группы условно-патогенных грибов, для
развития которых в организме нужны благоприятные условия: нарушения
обмена веществ, различные фермен-топатии, гормональные расстройства,
иммунодефицитность, недостаток витаминов, изнурительные инфекционные и
злокачественные болезни и т. д.
XVII.1.2. ВОЗБУДИТЕЛИ МИКОЗОВ И УСЛОВИЯ ИХ ИЗУЧЕНИЯ
Среди возбудителей грибковых заболеваний человека встречаются
представители зигомицетов (Mucorales, Entomophthorales), аскомицетов
(Hemiascomycetes) - дрожжи, дрожжеподобные грибы, плектомице-тов
(Plectomycetes) - аспергиллы, пенициллы, некоторые дерматофиты.
390
Большинство патогенных грибов имеет септированный мицелий диаметром 2-5
ммк и споры различной формы и размера, служащие для размножения,
сохранения и распространения грибов. Они бывают круглыми или
прямоугольными, одно- или многоклеточными, бесцветными или окрашенными в
разные цвета. По происхождению их подразделяют на бластоспоры и
артроспоры, хламидоспоры, макро- и микроконидии [51, 201]. Многим
патогенным грибам свойственно существование в двух морфологических
формах: тканевой - паразитарной и в культуре - морфологически более
разнообразной.
Для работы с патогенными грибами требуются предметные и покровные стекла,
стерильные градуированные и пастеровские пипетки, предметные стекла с
углублением, шлифованные стеклянные кольца (10 X X 2 X 6 мм),
металлическая петля и лопаточка, препаровальные иглы, шприцы с набором
иголок, стерильные пробирки и чашки Петри, спиртовка, УФ-лампа с
фильтрами для лучей Вуда, иммерсионный микроскоп, свежие питательные
среды, стерильный физиологический раствор и дистиллированная вода.
Необходимые реактивы: 1) 30%-ный раствор КОН; 2) 96%-ный этанол; 3) смесь
спирта (25 мл) с глицерином (25 мл) в воде (50 мл); 4) 10%-ная серная
кислота; 5) лактофенол (жидкость Амана): 10 мл кристаллического фенола,
10 мл молочной кислоты, 20 мл глицерина, 10 мл воды (в темных флаконах);
6) хлор а л лактофенол: 4 г хлоралгидрата, 4 г фенола, 2 г молочной
кислоты, 1 г салицилата натрия; 7) жидкость Пинуа: 10 г хлоралгидрата, 5
г глицерина, 5 мл воды, 2,5 мл 2%-ного раствора уксуснокислого свинца.
Красители: 1) синий лактофенол: 0,04 г сини (С4В), 10 мл лактофенола; 2)
карболовый генциановый фиолетовый; 3) карболовый фуксин; 4) водный фуксин
для докраски по Граму; 5) водная синь для окраски по Цилю - Нильсену; 6)
уксуснокислая синь: 100 мл воды, 0,05 г сини (С4В), 3 мл кристаллической
уксусной кислоты; 7) фиксирующая жидкость по Буину: 300 мл насыщенного
раствора пикриновой кислоты, 100 мл 40%-ного раствора формалина, 20 мл
ледяной уксусной кислоты; продолжительность фиксации 1-3 дня; 8) растворы
дезинфицирующих веществ: 5%-ный фенол, 10%-ный хлорамин; 9) вазелиновое
масло, твердый парафин [361].
Работа с живыми патогенными грибами в лаборатории требует большой
четкости и осторожности. Пересевы следует проводить в чистых боксах,
заражение животных-в отдельных помещениях, выращивание- в специальных
термостатах с оптимальной для развития гриба температурой. Остатки
патологического материала, неиспользованные культуры грибов, загрязненная
грибами посуда и пипетки автоклавируют в специальных боксах. Отработанные
препараты погружают в 10%-ный раствор хлорамина и тщательно промывают
после кипячения. Разбитые пробирки и другую посуду с живыми культурами
грибов сразу же дезинфицируют 5%-ным фенолом или 10%-ным хлорамином в
течение часа с последующей влажной уборкой помещения дезинфицирующими
средствами и УФ-облучением стен и воздуха помещений в течение 1-1,5 ч.
Загрязненные живыми грибами руки моют с мылом, протирают спиртом и
тщательно ополаскивают водой. При травматическом повреждении кожи,
порезах, попадании заразного материала на слизистую глаз немедленно
проводят лечебно-профилактические мероприятия.
391
XVII.2. СБОР, ОБРАБОТКА И ПЕРЕСЫЛКА МАТЕРИАЛОВ
ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
XVII.2.1. ИЗОЛЯЦИЯ ГРИБОВ ИЗ ПОРАЖЕННЫХ
ТКАНЕЙ
Для выявления грибов применяют наложение на очаг поражения на 3-4 дня
влажной повязки: стерильный слой марли или ваты, асеп-тично пропитанной
физиологическим раствором, под компрессной бумагой и ватой. Добавление к
