Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
ионизирующей радиации, или радиочувствительностью. Необходимо заметить,
что должна быть предельная четкость в интерпретации этого термина, под
которым следует понимать поражаемость изучаемых объектов [486].
Альтернативой радиочувствительности служит понятие радиоустойчивости, или
радиорезистентности. На радиоустойчивость микроорганизмов влияют
физиологическое состояние облучаемых клеток, интенсивность дозы
облучения, состав воздушной среды, в которой находятся клетки при
облучении, температура культивирования, состав питательной среды, наличие
радиозащитных веществ и пр. [158, 161, 592 и др.].
Для оценки радиочувствительности организма и сравнения радио-
чувствительности разных организмов первостепенное значение имеет
выбранный критерий. Наиболее общим показателем является изменение
выживаемости организма в зависимости от заданной дозы облучения [161,
230, 261, 432, 463, 486]. В радиобиологических исследованиях широко
применяют графическое выражение зависимости выживаемости организмов от
действия диапазона заданных доз, или дозная кривая выжи-
13 *"
885
ваемости. Кроме этого критерия часто используются величины ЛД37 и ЛДБ0.
Доза ЛД87 называется средней летальной дозой и характеризует дозу
облучения, nptf которой выживает 37% исходного количества клеток. Эта
величина не случайна, а определяется соотношением N/Nq = \!е ^0,377, или
37%, где N - количеств оставшихся живых клеток; N0 - количество клеток до
облучения; е - основание натуральных логарифмов, равное 2,718. Величина
ЛД50 соответствует дозе облучения, вызывающей гибель 50% объектов.
Применяют также (в основном в опытах на животных) дозу ЛД?^, т. е. дозу,
летальную для половины облученных объектов при наблюдении за результатами
в течение 30 дней, дозы ЛД90 и ЛД99, при которых погибают соответственно
90 и 99% облученных клеток, а также сублетальные и летальные дозы [34,
88, 154, 217, 417]. Например, сублетальной считается такая доза, при
Которой выживаемость облученных спор (т. е. способность их образовывать
макроколонии при последующем посеве) составляет 0,01 - 0,001% от контроля
- необлученных конидий (на примере видов семейства Dematiaceae [154]).
Виды этого семейства, радиоустойчивость которых на уровне сублетальной
дозы превосходит 500 крад, отнесены к радиоустойчивым, а к
радиочувствительным - виды, у которых значения сублетальной дозы
составляют 400 крад и ниже.
Аналогичным образом критерием устойчивости к УФ-излучению для тех же
видов принята выживаемость их после облучения дозой порядка 400 • 103
эрг/см2, или 400 Дж/м2, что соответствует состоянию стабильной
устойчивости облучаемой клеточной пойуляции. Виды, выживаемость которых в
этих условиях составляет 1% и выше, относятся к УФ-устойчивым, а 0,01% и
ниже- к УФ-чувствительным. Показателем радиочувствительности
фитопатогенных объектов может служить степень поражения растения,
определяемая по принятой шкале [788].
XVI.4.1. ПОСТРОЕНИЕ ДОЗНЫХ КРИВЫХ ВЫЖИВАЕМОСТИ
Для построения дозных кривых выживаемости данные о количестве выросших
макроколоний из облученной суспензии спор обрабатывают статистически с
определением среднего квадратичного отклонения и доверительных интервалов
[251] и выражают в процентах по отношению к числу макроколоний,
образовавшихся из необработанных конидий (контроль). На оси абсцисс
откладывают значения доз облучения в линейном масштабе, а на оси ординат
- выживаемость облученных клеток в; процентах. От каждой точки на
графике, соответствующей выживаемости гриба при определенной дозе, вверх
и вниз наносят доверительные интервалы, через которые и проводят искомую
кривую выживания. Принято откладывать логарифм процента выживаемости, т.
е. график строят в полулогарифмической системе координат. Такое
построение позволяет, во-первых, нанести большой диапазон значений
выживаемости (от 100 до 0,001% и менее) и, во-вторых, облегчает
математический анализ дозных кривых [173, 229, 478].
При построении дозной кривой выживаемости большое значение придается
правильной статистической обработке полученных данных. Рекомендуется
ставить опыты в 4-10 повторностях, применяя одни и те же дозы [173]. При
таком подходе дозная кривая выживаемости строится по нескольким десяткам
экспериментальных точек. Например, при облучении 10 дозами в пяти
повторных опытах получают 50 точек. Кроме того, рекомендуется при
обработке данных вычислять не среднее ариф-
386
метическое, что обычно встречается в большинстве исследований, а среднее
геометрическое значение, т. е. антилогарифм среднего из логарифмов
процента выживаемости. Иногда дозные кривые строят по методу наименьших
квадратов [448], который довольно сложен и применяется обычно на
начальных стадиях работы, когда необходимо определить тип полученной
кривой.
XVI.4.2. ТИПЫ ДОЗНЫХ КРИВЫХ ВЫЖИВАЕМОСТИ
В большинстве случаев наблюдается три типа кривых выживаемости -
экспоненциальная, сложная экспоненциальная и сигмоидная, или S-образная
