Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
образовавшегося после облучения раствора же-лезооксалата калия в течение
определенного времени, и зная квантовый выход реакции фотовосстановления,
легко рассчитать количество квантов света, попавших на кювету с
актинометрическим раствором (подробный расчет приведен в [187]). Пусть,
например, средняя длина волны света к= 300 нм = 30 ООО см-1. Одному
кванту света с такой длиной волны соответствует энергия 6,61 • 10-12
эрг/см-"1 = 1,986 X X10-16 эрг/квант = 11,96 • 107 эрг/эйнштейн; 1
Эйнштейн = 6,02 " 1023 квантов. Если квантовая интенсивность света,
определенная актинометрически, равна 1 • 10-10 эйнштейн/с = 6,02 • 1013
квант/с, то интенсивность светового потока, выраженная в эргах на секунду
будет равна 6,61 • 10"12 эрг/квант ¦ 6,02 • 1013 квант/с = 398 эрг/с =
3,98 X X 10"5 Дж/с = 3,98 • 10~5 Вт.
В процессе работы с источниками УФ-лучей или искусственного солнечного
излучения необходимо соблюдать меры предосторожности. При длительной
работе таких установок в помещении накапливается значительное количество
озона, который нужно выводить либо непосредственно от лампы в вытяжную
систему, либо после работы хорошо проветривать помещение. УФ-излучение
порядка 250 нм и менее небезопасно для человека, потому смотреть на
горящую лампу без специальных очков или находиться под ее лучами
запрещается. Особой осторожности требует работа с дуговыми лампами (типа
ДРШ или ксено-новых). Излучатель в этом случае помещают в металлический
кожух, который беспрерывно охлаждается проточной водой.
XVI.2.3.3. ОБЛУЧЕНИЕ ВОДНОЙ СТАНДАРТИЗОВАННОЙ ВЗВЕСИ СПОР
Выращенные на плотной питательной среде культуры грибов заливают
стерильной водопроводной водой и тщательно взбалтывают для отделения спор
от мицелия. Полученную суспензию фильтруют через ватный фильтр, разводят
до нужной концентрации и подсчитывают число спор в камере Горяева или
Тома [288]. Для этого на предметное стекло с сеткой наносят кашт
исследуемой взвеси и затем к боковым пластинкам камеры Горяева притирают
покровное стекло. Рекомендуется споры подсчитывать в пяти больших
квадратах в 3-5 повторностях. Общий объем пяти квадратов составляет 1/50
мм3, тогда количество спор в 1 мм3 соответствует их сумме в пяти
квадратах, умноженной на 50. Количество спор в 1 мл в 1000 раз больше.
По 4 мл приготовленной таким образом суспензии разливают в обезжиренные,
тщательно вымытые и прсстерилизованные чашки Петри диаметром 9 см с
идеально ровной поверхностью. При соблюдении этих
379
условий суспензия распределяется по дну чашки тонким слоем толщиной 0,1
мм. Затем чашки Петри помещают на определенном расстоянии от источника
УФ-лучей и снимают крышки в момент включения секундомера. Облучение ведут
при слабом покачивании в темном боксе. Через заданные промежутки времени
чашки закрывают крышками и облученные конидии высевают методом
последовательных разведений с последующей заливкой их расплавленным и
охлажденным до 40° С сусловым агаром. Для исключения темновой репарации и
фотореактивации посев проводят сразу после облучения и только при красном
свете. Недостаток метода облучения водной суспензии состоит в том, что
длительное экспонирование приводит к частичному испарению жидкости, что
искажает результаты подсчетов в сторону их завышения. Во избежание этого
рекомендуется предварительно установить количество воды, испарившейся за
время облучения, и затем довести облученную взвесь до исходного объема
[152]. Более точные данные получают при облучении суспензии в чашках из
кварцевого стекла, проницаемого для УФ-лучей, или в чашках Петри,
накрытых пластинками из оптически чистого кварцевого стекла. При
облучении значительных количеств взвеси применяют электромагнитные
мешалки. Прорастание спор при заданной дозе облучения определяют, облучая
споры грибов в капле воды на предметном стекле с последующей заливкой их
питательной средой [97]. Однако отсутствие сравнимых количественных
результатов снижает качество эксперимента.
Облучение спор проводят не только для определения их устойчивости к
данному излучению (в частности, по критерию выживаемости), но и для
получения мутантов, изучения процессов темновой и фотореактивации,
углубленного исследования условий, модифицирующих облучение (кислородный
эффект, изменение условий температуры, влажности и др.). Необходимый этап
работы в этом направлении - исследование радиозащитного эффекта веществ.
С этой целью раствор испытуемого вещества (желательно водный) используют
для приготовления стандартизованной взвеси конидий гриба, чувствительного
к облучению. Контролем служит чувствительность или выживаемость этого же
объекта в воде. По разнице выживаемости конидий после облучения в водном
растворе вещества и в воде судят о степени радиозащитного эффекта
вещества [160, 277].
О влиянии УФ-излучения на данный вид судят по выживаемости конидий, т. е.
количеству макроколоний, выросших из облученных спор по сравнению с
необлученными. При этом необходимо одновременно облучить не менее 6-8
