Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
помещают на поверхность питательной среды в чашки Петри и экспонируют в
заданных условиях освещения определенное время. В конце опыта учитывают
культуральные и морфологические изменения изучаемого гриба, а также, в
зависимости от целей исследования, его физиологическую активность.
Инокулюм вырезают прсфламбированным скальпелем обычно из предкраевой зоны
колонии, растущей на твердой питательной среде, и помещают на исследуемый
субстрат. Возраст колонии и место взятия инокулюма должны быть всегда
одинаковыми. Инокулюм обычно имеет квадратную или треугольную форму (5X5
мм), возраст культуры 10-15 сут. Следует отметить, что в методах по
изучению действия света на грибы почти отсутствуют количественные
характеристики полученных результатов. Исключение составляет метод [668],
согласно которому действие света оценивают по количеству образовавшихся
конидий на определенном участке колоний.
Изучению фоторецепторов, определяющих реакцию организма на световое
воздействие, придают большое значение [536, 571, 795]. Большинство
исследователей придерживаются гипотезы множественности фоторецепторов, из
которых к наиболее изученным относятся кароти-ноидные и флавиновые
пигменты. Для доказательства принадлежности вещества к фоторецепторам
используют мутанты, дефектные по этому
377
соединению. Так, уменьшение фоточувствительности исходных культур,
содержащих каротиноидные или меланиновые пигменты, по сравнению с
апигментными мутантами является одним из косвенных доказательств
принадлежности к фоторецепторам [156, 558, 803]. Обратимость фотоэффекта
(по критерию интенсивности спороношения) при чередовании освещения
голубым и фиолетовым светом или голубым и красным с длинноволновым
красным позволила установить наличие двух фоторецепторов у гриба Botrytis
cinerea [795]. Прямые доказательства существования фоторецепторов связаны
с выделением, очисткой и изучением их физико-химических свойств [156,
666].
XVI.2.3. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ДЕЙСТВИЯ УФ-ЛУЧЕЙ
НА ГРИБЫ
УФ-излучение составляет 1 - 10% общей солнечной радиации, достигающей
поверхности земли. Количество и качество УФ-лучей определяется
прозрачностью земной атмосферы, положением Солнца, комплексом
метеорологических и географических условий.
XVI.2.3.1. ФИЗИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, ИСТОЧНИКИ ИЗЛУЧЕНИЯ,
ЕДИНИЦЫ ИЗМЕРЕНИЯ, ДОЗИМЕТРИЯ
УФ-область солнечного спектра, к которой относятся лучи с длиной волны
менее 400 нм, в свою очередь делится, на длинноволновую, А (320-380 нм),
средневолновую, Б (280-320 нм) и коротковолновую, С (200-280 нм) области,
а также область вакуумного ультрафиолета (20-200 нм) [226].
Самым распространенным источником искусственного УФ-излучения является
электрический разряд в парах ртути. При низком давлении паров ртути
преобладает излучение с длиной волны 254 нм. С увеличением давления паров
ртути излучение изменяется в сторону длинноволнового. Принципиально могут
быть созданы лампы с преобладанием излучения в любом заданном участке
области УФ-спектра. В настоящее время выпускаются ртутные лампы низкого
давления - БУВ и ЗУВ - мощностью 15-80 Вт. Лампы высокого давления типа
ПРК являются источниками преимущественно длинноволнового излучения. В
качестве источника УФ-излучения в микробиологии обычно применяют
продозиметрированную лампу типа БУВ, включенную в сеть через стабилизатор
напряжения. Лампу с отражателем фиксируют в определенном положении.
Расстояние от облучаемого объекта до поверхности лампы должно быть
постоянным. Максимальный биологический эффект оказывают УФ-лучи с длиной
волны 260-270 нм, так как они поглощаются нуклеопротеидами. По действию
УФ-лучей на растительные и животные объекты различают бактерицидное и
эритемное излучения. Первое связано с коротковолновыми лучами (до 280 нм)
и оценивается по способности уничтожать микроорганизмы. Эритемное
излучение вызывает покраснение кожи человека или животных.
Интенсивность (F) лучевого потока [287] обычно выражают в ваттах.
Поверхностная плотность падающего на облучаемую поверхность УФ-потока: Е
= F/s, где s - площадь облучаемой поверхности. Дозу УФ-облучения
определяют уравнением Н = Et, где t - время облучения.
Основные методы УФ-дозиметрии - химический, термоэлектрический,
люминесцентный и фотоэлектрический [187], причем наиболее
378
широко применяется последний. Приборы для измерения дозы УФ-из-лучения
называются уфидозиметрами. Их действие основано на регистрации фототока,
вызываемого фотонами света, попадающими на светочувствительную
поверхность фотокатода. Точен и удобен также метод химической дозиметрии
[111, 187].
XVI.2.3.2. РАСЧЕТ ИНТЕНСИВНОСТИ СВЕТОВОГО ПОТОКА ЛАМПЫ БУВ-15
Химическим актинометром определяют обычно количество квантов света. Для
расчета интенсивности света (Дж/с) необходимо знать среднюю длину волны
используемого света. Предположим, что измерения ведутся железооксалатным
актинометром [187], действие которого основано на фотовосстановлении
Fe3_*~ в K3Fe (С204)3 до Fe2_*\ Измеряя количество Fe2~^~,
