Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
опытах следует использовать корни клонового происхождения, т. е.
полученные путем вегетативного размножения от одного исходного корня,
взятого от проростка. Для стерилизации семян используют водные растворы
хлорамина (3-6%-ный), сулемы (0,1%-ный), этанола (95%-ный), пергидроля
(2-8%-ный).
Изолированные корни выращивают на стерильной жидкой или агаризованной (1%
агара) питательной среде Смирнова, содержащей (мг/л): 80KNO3; 200Са
(N03)2; 65KCI; 18,6NaH2P04 • 2Н20; 740MgSO4 X X 7Н20; 200Na2S04; 3,5
FeC6H50: • 3H20; 3,6MnCl2 * 4Н20;
2,2 ZnS04 • 7Н20; 1,4 H3B03; 0,65 KJ; 0,025 Na2Mo04 . 2Н20;
0,004CuS04 • 5 Н20; 0,5 никотиновой кислоты; 0,1 тиамина; 0,1
пиридоксина; 20 000 сахарозы. К питательной среде перед автоклавированием
добавляют раствор фитотоксина. Корни выращивают в темноте при темпера -
327
туре 27° С и относительной влажности воздуха 70%. Результаты опыта
учитывают после 7-дневного роста. Измеряют длину главных корней и
суммарную длину всех боковых на каждом корне, подсчитывают число боковых
корней и определяют сырую массу главных корней. Средние данные по
вариантам опыта приводят по этим показателям роста в расчете на один
корень.
X1I.3.3. КУЛЬТУРА ИЗОЛИРОВАННЫХ ЛИСТЬЕВ
Культура изолированных листьев не требует стерильных условий и
использования специальных питательных сред. Особенно это касается
культуры целых листьев. Для успешного культивирования изолированных
листьев важен выбор объекта с учетом целей работы и способности
изолированных листьев к укоренению. Легко укореняются листья двудольных
растений. Поэтому их чаще всего используют для опытов. Предпочтение
следует отдавать молодым листьям, а также листьям молодых и сильных
растений. Целесообразно также использовать семядоли, которые у многих
двудольных растений хорошо укореняются и могут самостоятельно
существовать в течение нескольких месяцев.
Изолированные листья культивируют в сосудах с водой или питательным
раствором, в который вносят раствор фитотоксина. Листья ЕЫращивают в
теплицах или боксах под прозрачной пленкой в условиях естественного
освещения или при освещении люминесцентными лампами; их ежедневно
поливают или опрыскивают водой. В конце опыта учитывают сырую массу
листьев и способность листовых черенков к корнеобразованию. Изолированные
диски из листьев выращивают как в стерильных, так и нестерильных
условиях. Культивирование тканей листьев в стерильных условиях описано в
разделе XI 1.3.1.
Для культивирования в нестерильных условиях диски вырезают из листьев
разного возраста: из молодых - перед началом фазы наиболее интенсивного
прироста числа клеток, из листьев среднего возраста - в конце фазы
деления. Диски вырезают пробочным сверлом диаметром
б-12 мм из участков листа без крупных жилок. Вырезанные диски помещают в
чашки Петри с 10-15 мл 1%-ного раствора сахарозы, приготовленного на
растворе Кнопа, взятого в пятикратном разведении. Диски инкубируют в
условиях естественного освещения или при круглосуточном освещении
люминесцентными лампами. Ежедневно диски после тщательной промывки в
дистиллированной воде переносят в новые инкубационные среды. В конце
опыта определяют сырую массу дисков и количество клеток. Количество
клеток определяют в счетной камере Фукса - Розенталя после 30-45-минутной
мацерации'ткани на кипящей водяной бане в растворе 5%-ной уксусной
кислоты, приготовленной на 2 н. растворе соляной кислоты.
XII.4. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ПОСТУПЛЕНИЯ ФИТОТОКСИНОВ В РАСТЕНИЯ
Растения выращивают в химических стаканах с питательным раствором, в
который вносят испытуемый фитотоксин. Фитотоксин добавляют в количестве,
не вызывающем гибели растений. Растения в стаканах поддерживаются
парафинированной марлей. В качестве субстрата используют также почву или
песок, в которые внесен раствор фито-
323
токсина. Таким образом изучают корневое поглощение фитотоксинов из
растворов и почвы.
Для изучения поглощения фитотоксинов семенами и дальнейшего их
распределения в растущем растении семена замачивают в течение суток в
растворе фитотоксина, затем вынимают из раствора, промывают
дистиллированной водой и раскладывают на увлажненную фильтровальную
бумагу для проращивания. Проростки высаживают на парафиновые кружки в
стаканы с питательным раствором. Через определенные промежутки времени
отбирают растения для анализа и расчленяют на отдельные органы (корни,
стебель, листья). Отобранные пробы растирают в ступке и из полученной
кашицы отжимают сок. Фитотоксические вещества в соке определяют с помощью
биотестов. Так как из тканей растений отжимается малое количество сока,
то лучше всего применять биотест на рост корней кресс-салата. Семена
кресс-салата проращивают на увлажненной фильтровальной бумаге в
термостате при температуре 27 С в течение 12 ч. Полоски фильтровальной
бумаги шириной 2 см смачивают 1 мл полученного сока и на них раскладывают
по 10 проросших семян кресс-салата с корешками одинаковой длины (3 мм).
Контролем служит полоска фильтровальной бумаги, смоченная соком,
