Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
Помимо перорального способа введения водных вытяжек из грибов и
применения кожной пробы для определения токсических грибов существует
подкожное и внутрибрюшинное введение экстрактов токсинов и культуральных
жидкостей. Для этих целей используют мышей, крыс, морских свинок,
кроликов. За животными ведут постоянное наблюдение в течение 10 дней.
Отмечают общее состояние животных, их массу, изучают состав крови.
Таблица 22. Пример расчета ЛД*б0 [300]
Доза, мл Количество животных на дозу Количество павших животных
d zd
0,9 5 5
0,8 5 4 4,5 0,1 0,45
0,7 5 2 3,0 0,1 0,30
0,6 5 4 3,0 0,1 0,30
0,5 5 3 3,5 0,1 0,35
0,4 5 1 2,0 0,1 0,20
0,3 5 0 0,5 0,1 0,05
* (аМ) = 0,9 = о,57; 2 (zd) = 1,65.
5
Подкожное введение. Для подкожной инъекции используют водные вытяжки из
грибов, культуральные жидкости, экстракты токсических веществ. Мышам
вводят однократно по 0,5 -1 мл, морским свинкам одно- или двукратно - 2-3
мл, кроликам двукратно - 2-3 мл, Внутрибрюшинное введение. Водные и
спиртовые экстракты токсических веществ (7-9°) или культуральную
жидкость, профильтрованную через фильтр Зейца, вводят по 0,5-1 мл
внутрибрюшинно мышам, по 2-3 мл морским свинкам, по 5 мл кроликам.
303
Расчет летальной дозы токсических веществ. Для оценки переносимости и
токсичности препарата определяют его максимально переносимую дозу (МИД),
абсолютно смертельную дозу (ЛД100) и дозу, вызывающую гибель 50%
подопытных животных (ЛД50). Опыт начинают обычно с определения этих доз
для белых мышей. Препарат вводят в разных дозах: от тех, которые не
вызывают у животных явлений отравления, до вызывающих гибель всех
подопытных мышей.
Таблица 23. Пример расчета среднесмертельной дозы (Хср)
Доза, мг/кг Количество подопытных животных Количество павших животных
Смерт- ность, % Доза, мг/кг Количество подопытных животных
Количество павших животных Смерт- ность, %
20 10 0 0 50 10 8 80
30 10 0 0 60 10 10 100
40 10 4 40 70 10 10 -
Расчет 1. (30+40) (40-0) = 2800.
2. (40+50) (80-40) = 3600.
3. (50+60) ( 100-80) = 2200.
Сумма = 2800+3600+2200-8600.
8800 , .
СР = "200" = (мг/кг)'
Каждую дозу вводят 5 или 10 мышам, обычно внутрибрюшинно. Учитывается
количество животных, павших за все время наблюдения.
ЛД50 рассчитывают методом Кербера (аМ) = Dm - 2(zd)/m, где (аМ) - ЛД50;
Dm - доза, вызывающая гибель всех подопытных животных; г - половина числа
животных, павших от двух последующих доз; d - разница объемов двух
последующих доз; т - количество подопытных животных (табл. 22). Вместо
ЛД50 можно рассчитывать среднюю смертельную дозу (мг/кг) по Г. Н.
Першину: Хср = (а + + в) (т - п)1200, где (а + в) - сумма двух
последовательных доз; (т - п) - разность процента смертности от двух
последующих доз; Хср- средняя смертельная доза (табл. 23) [300].
Х.3.3. ПАТОЛОГИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ НЕКОТОРЫХ
МИКОТОКСИНОВ
Токсикоз, вызванный подкожным или внутрибрюшинным введением токсических
веществ грибов, характеризуется угнетением состояния животного, снижением
массы, развитием воспалений в месте инъекции. Резко токсичные штаммы
грибов рода Fusarium вызывают гибель лабораторных животных на 1-4-е сут в
зависимости от вида животного. Слабо токсичные штаммы вызывают
заболевания с благоприятным исходом.
Подкожное или внутрибрюшинное введение токсинов Stachybot-rys alternans и
D. toxicum ведет к развитию нервных явлений - судорог, резкому
возбуждению и гибели через 6-10 ч. Некоторые виды грибов рода Aspergillus
могут вызывать гибель мышей через 4-6 ч, морских свинок через 1-2 сут,
кроликоз - через более продолжительное время. Токсины грибов рода
Penicillium и Pithomyces chartarum
304
нарушают функции желудочно-кишечного тракта и печени. Интенсивность
проявления токсикоза зависит от степени токсичности грибов [46, 299, 485,
502, 580, 659, 768, 770, 789].
Микотоксины условно делят на две группы: вызывающие поражение печени и
почек и вызывающие поражение других органов.
Х.3.3.1. МИКОТОКСИНЫ, ВЫЗЫВАЮЩИЕ ПОРАЖЕНИЕ
ПЕЧЕНИ ИЛИ ПОЧЕК В КАЧЕСТВЕ
ПЕРВИЧНОГО ИЗМЕНЕНИЯ
Спородесмины вызывают поражение печени в форме острого воспаления желчных
протоков, которое заканчивается их фиброзным пе рерождением, а также
воспаление кожи лица, губ и других органов, не защищенных от солнечного
света. Из лабораторных животных чувствительны морские свинки, кролики и
крысы.
При скармливании 50-100 мкг спородесмина морским свинкам наблюдаются
слабые и при введении 100-200 мкг сильные поражения печени. Животным
вводят токсин в пищу в течение 7 дней; исследуют на 21-й день после
начала дачи токсина. В зависимости от дозы и продолжительности кормления
отмечают следующие патологоанатомические изменения: желчная эпителиальная
гиперплазия; поражение внутридольных желчных протоков; поражение сосудов;
фокальные коагулятивные некрозы паренхимы.
Охратоксины вызывают поражение почек, выражающееся в образовании некрозов
тубулярных клеток, в печени наблюдаются гиалиновая дегенерация и жировое
перерождение клеток паренхимы. Чувствительны кролики и утята.
