Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
корма и продуктов определяют по времени гибели мышей и количеству
введенной вытяжки из исследуемого образца*
Х.2.4.2. КОЖНАЯ ПРОБА НА КРОЛИКЕ
Этим методом определяют токсичность зернофуража, продуктов питания,
грубых, комбинированных кормов. Токсичность шрота, жмыха, кормов
животного происхождения определяют другими методами.
Готовят экстракт из исследуемого образца. Для этого 50 г измельченного
корма помещают в пакеты из фильтровальной бумаги и экстра-
292
гируют в аппарате Сокслета эфиром (петролейным или серным) или другим
органическим растворителем в течение 6 ч. Экстракт переносят в
выпарительную чашку или бюкс и испаряют в вытяжном шкафу при комнатной
температуре до исчезновения запаха растворителя.
При отсутствии аппарата Сокслета 50 г измельченного корма помещают в
стеклянные 0,5-литровые банки с притертой пробкой и заливают эфиром,
спирто-эфиром (1 : 3), бензолом или метанолом так, чтобы жидкость
покрывала пробу на 2-3 см. Экстрагируют в течение 24 ч при комнатной
температуре, периодически встряхивая. Затем жидкость сливают через
бумажный фильтр в выпарительную чашечку и оставляют в вытяжном шкафу до
полного испарения растворителя. Экстракт зерна имеет вид растительного
масла, экстракт грубых кормов - крошковатую консистенцию, поэтому перед
постановкой кожной пробы в него добавляют 2 капли растительного масла или
рыбьего жира.
В качестве подопытных животных используют кроликов (серых, белых) массой
не менее 1,5-2 кг с непигментированной кожей. За несколько часов до
постановки опыта кроликам выстригают шерсть на боках до полного оголения
кожи на участке размером 3 X 6 см (на каждом боку допускается делать не
более 3 проб). На оголенную, неповрежденную поверхность кожи кролика
наносят экстракт и слегка втирают его в кожу стеклянным шпателем или
палочкой. Экстракт наносят двукратно с интервалом в 24 ч. Для
предупреждения слизы-вания нанесенного экстракта на шею кролика надевают
фанерный, картонный или резиновый воротник. За животными ведут ежедневные
наблюдения.
Реакцию учитывают ежедневно. Воспалительный процесс на коже кролика
развивается на 1-2-е сут после нанесения экстракта, усиливается на 4-5-е
сут, достигает максимума иногда на 7-е сут. В отдельных случаях эти сроки
могут варьировать. При учете реакции на коже кролика определяют глубину и
характер поражения кожи, так как это позволяет судить о степени
токсичности корма, а следовательно, рационально использовать его.
Различают четыре степени интенсивности воспалительной реакции после
нанесения экстракта [420]: первая - покраснение, повышенная
чувствительность кожи, шелушение, исчезающие через 1-2 дня после
нанесения экстракта (корм очень слабо токсичный); вторая - покраснение,
болезненность, незначительное утолщение кожи, мелкие одиночные с просяное
зерно или меньше желтоватые пузырьки; затем на их месте образуются тонкие
корочки подсохшего экссудата, шелушение (корм слабо токсичный); третья -
покраснение, сильное утолщение, болезненность, складчатость кожи; на всей
поверхности образовавшегося очага возникают темноватые пузырьки, затем
поверхностный сухой некроз, иногда язвы, сплошной тонкий струп (токсичный
корм); четвертая - покраснение, сильный отек, выступающий в виде
массивного вала на нижней границе очага; глубокий сухой некроз,
образование долго незаживающих язв, струп толстый и сплошной (корм резко
токсичный).
Контролем служат экстракты доброкачественного зерна или другого
субстрата. Отдельные виды токсинообразующих грибов не оказывают
дерматонекротического действия, например патулин и некоторые др.
293
A.4.4.J. | ЛАЗНАЯ ПРОБА
Измельченный корм заливают водой в соотношении 1 : 10. После 24-часозого
экстрагирования фильтруют через марлю, а затем через бумажный фильтр.
Контролем служит водный экстракт из доброкачественного зерна. Подопытному
животному в конъюнктивальный мешок одного глаза вводят по 5 капель
исследуемой вытяжки с интервалом 5 мин в течение часа. Во второй глаз
вводят контрольный экстракт. Через час после введения токсичного
экстракта отмечается расширение зрачка на 3-4 мм, которое сохраняется в
течение 5-6 ч. Контрольная вытяжка вызывает кратковременное расширение
зрачка на 1-2 мм. Эта проба разработана в основном для определения
токсинов грибов рода Fusarium [374]. Метод применяют для определения
токсичности Pithomyces chartarum, выделяющего споридесмин. Введение этого
вещества в глаз кролику вызывает поражение роговицы и косоглазие [243].
Х.2.4.4. ПРОБА НА БОРОДКАХ КУР
Измельченный корм заливают эфиром или спирто-эфирной смесью в соотношении
1 : 2 или 1 : 3, экстрагируют в течение 24 ч, фильтруют, растворитель
испаряют. Маслянистый экстракт (0,1-0,2 мл) вводят в одну из бородок
курицы. В другую бородку вводят экстракт из доброкачественного зерна.
Реакцию учитывают по развитию воспалительного процесса, отека,
кровоизлияний и некроза на месте введения. Толщину бородки измеряют
кутиметром [63].
