Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
паутинистого, порошистого мицелия вследствие обильного спорообразования,
F. graminearum нередко образует на зерне спородохии. Зерно, пораженное
фузариями во время вегетации растений, часто щуплое, светло-розово-
красно-коричневого оттенка, нередко с поверхностными спо-родихиями
телесного, розового или оранжевого цвета.
Х.2.3.4. ВЫДЕЛЕНИЕ ГРИБОВ ИЗ СИЛОСА, ЖМЫХА
И МУЧНИСТЫХ КОРМОВ
Нарезанный силос раскладывают (по 10 кусочков) на поверхности
агаризованной среды в чашки Петри. Так же сеют и жмыхи, предварительно
измельчив их. Для выделения грибов из мучнистых кормов (муки, отрубей,
комбикорма, шрота, мясокостной и рыбной муки) пользуются методом
непосредственного посева и методом разведения.
10 г мучнистого корма помещают в стерильную колбу, куда добавляют 90 мл
стерильной воды и получают основное разведение (1 : 10). Колбу с
содержимым взбалтывают в шуттель-аппарате или вручную в течение 15-20
мин. Из основного разведения готовят разведения 1 : 100, 1 : 1000, 1 : 10
000 и т. д. на стерильной воде. Степень разбавления основной взвеси
зависит от содержания в корме спор грибов. Комбикорм сеют обычно в
разведении 1 : 1000 в 5 чашек Петри, при большей степени поражения
грибами - в разведении 1 : 10 000 в 8-10 чашек. Разведения готовят с
помощью стерильных пипеток; для каждого разведения рекомендуется брать
отдельную пипетку. По 1 мл готового разведения вносят в чашки Петри. При
этом материал распределяют каплями на дне чашки; в чашки заливают по 10
мл расплавленной агаризованной остуженной до 40-45° С среды. Круговыми
движениями чашек материал равномерно распределяют в агаре. Посевы всех
видов кормов культивируют при температуре 22-25° С. Чашки просматривают
на 3-, 5-, 9-й день после посева. Рекомендуется посевы выдерживать
дополнительно 2-3 дня для выявления медленно развивающихся форм.
Количественный учет грибов. Подсчет колоний начинают на 2-3-й день после
посева. Для облегчения подсчета дно чашки размечают карандашом на секторы
или используют счетную камеру Вольфюгеля. Проводят 2-3 последовательных
подсчета с интервалом в 2 дня. Общее количество зародышей данного вида
гриба определяют в пересчете на 1 г исследуемого корма с учетом его
разведения. Подсчет сопровождается дифференциацией грибов и выделением их
в чистую культуру для дальнейшего изучения и определения их
токсинообразующей способности.
10*
?91
Х.2.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТОКСИЧНОСТИ ЗЕРНА, ПРОДУКТОВ, КОРМОВ, ПОРАЖЕННЫХ
ГРИБАМИ
Исследования проводят в основном тремя способами: алиментарной пробой на
лабораторных животных, постановкой "кожной" пробы, специфическими физико-
химическими методами.
Х.2.4.1. АЛИМЕНТАРНАЯ ПРОБА КА ЖИВОТНЫХ
К токсическим веществам грибов Fusarium, Aspergillus, Penicillium и
других чувствительны мыши, морские свинки, кролики, кошки, куры, особенно
цыплята, голуби и утята. Токсичность кормов и продуктов питания
определяют путем скармливания их цыплятам 5-15-дневного возраста, утятам
1-10-дневного возраста, молодым мышам массой 20-25 г, а при определении
грубых кормов - молодым морским свинкам и кроликам. Суточную норму кормов
заменяют исследуемым кормом и скармливают его подопытным животным в
течение,не менее 10 дней. Токсикоз проявляется быстрее, если пораженный
корм скармливать животным натощак; для этого перед опытом животных не
кормят 5-10 ч (воду дают в неограниченном количестве). В опыте используют
3-6 животных. За подопытными животными ведут ежедневные клинические
наблюдения. В зависимости от степени токсичности и количества съеденного
животными корма, пораженного грибами, заболевание и гибель их могут
наступать в различные сроки.
Скармливание резко токсичного (фузариозного или пораженного токсическими
аспергиллами и пенициллами) зерна вызывает заболевание и гибель животных
на 1-3-й день с клиническими признаками поражения центральной нервной
системы (дрожь, судороги, параличи). Цыплята (5-10-дневные) и голуби
отличаются высокой чувствительностью к токсическим веществам грибов.
Характерными клиническими признаками отравления цыплят токсичным
фузариозным зерном являются сонливость, нередко понос. Характерный
признак токсикоза у голубей - рвота.
Положительными показателями токсичности кормов при постановке биопробы на
животных являются: потеря массы, расстройство желудочно-кишечного тракта
и центральной нервной системы, у птиц - цианоз гребня и сережек, развитие
анемии. Резко токсичные образцы кормов могут вызывать гибель подопытных
животных без проявления клинических признаков отравления [46, 301, 4С0,
420].
Токсичность жмыхов, шротов и кормов животного происхождения определяют
введением водной взвеси (1:2 или 1 : 3) исследуемого образца
непосредственно в желудок. Мышам в течение 3 дней через зонд вводят
натощак по 0,5 мл непосредственно в желудок вытяжку из корма. В качестве
зонда можно использовать одетую на шприц тупую, слегка согнутую иглу.
Этим методом можно определить токсичность и других кормов. Токсичность
