Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 134

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 279 >> Следующая

Rf. Полученные кривые сравнивают с кривыми известных антибиотиков,
составленными по тем же растворителям, для установления сходства с
известными препаратами. Эти данные используют также с целью выбора
наилучшего растворителя для последующей экстракции антибиотика из
культуральной жидкости или мицелия гриба.
Многие физиологически активные вещества - токсины, фарма-
276
1 2 3 5 6 7 Q 9 10 It 1113
Рис. 107. Сборные хроматограммы культуральных жидкостей:
а - Penicillium implicatum; б - P. kursanovi штамм 9585; в - P. bilai
штамм 134; г - P. multicolor штамм 4946 (хроматограммы проявлялись на
золотистом стафилококке, штамм 209); 1 - 13 - системы растворителей по
Шевчику:
1 - дистиллированная вода; 2 - 3%-ный раствор хлористого аммония;
3 - метанол; 4 - ацетон; 5 - этилацетат; 6 - бутанол, насыщенный водой; 7
- серный эфир; 8 - хлороформ; 9 - петролейный эфир; 10 - бензол; 11 -
этанол; 12 - 0,1%-ный раствор НС1; 13 - бутанол - ледяная уксусная
кислота - вода.
кологические препараты, стимуляторы и ингибиторы роста растений - также
оказывают антибиотическое действие. В некоторых случаях химические и
физические способы обнаружения таких препаратов не разработаны, поэтому
при их хроматографии также применяют биоавто-графические методы [474].
Некоторые антибиотики из грибов, например патулин, фузариевая кислота,
обладают фитотоксическими свойствами. Их идентифицируют по подавлению
роста растений.
IX.5.2.1. МЕТОД pH-БУМАЖНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Антибиотик хроматографируют в системах растворителей на бумаге,
обработанной буферными растворами (pH 2-10). При этом все антибиотики в
зависимости от особенностей хроматографического поведения можно разделить
на несколько групп. Для антибиотиков кислот (пенициллинов, гладиоловой
кислоты, цефалоспорина Р, цит-ринина, геодина, терреевой кислоты)
характерно уменьшение подвижности при увеличении pH. Антибиотики
оснований, наоборот, увеличивают подвижность при повышении pH. В случае
нейтральных антибиотиков (фреквентина, глиотоксина, патулина,
трихотецина,
277
виридина) значение Rf не зависит от pH буфера. Наибольшее значение Rf для
амфотерных антибиотиков наблюдалось при pH 7,0-8,0.
IX.5.2.2. МЕТОД КРУГОВОЙ БУМАЖНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Д. Доскочилова и М. Вондрачек [136] разработали систему идентификации
новых антибиотиков на стадии культуральных жидкостей. По внешнему
диаметру чашки Петри вырезают круг хроматографической бумаги. На
расстоянии 1 см от центра круга по радиусу наносят раствор антибиотика
или помещают агаровые блоки. В центре круга делают отверстие, в которое
вставляют фитиль. Длина фитиля равна высоте чашки, на дно которой
наливают соответствующий растворитель. В этот растворитель и погружают
нижний конец фитиля. Круг фильтровальной бумаги помещают на чашку и
прижимают сверху крышкой. Антибиотические вещества разгоняют в течение 1-
3 ч. Высушенный от растворителя круг хроматографической бумаги разрезают
на сегменты в соответствии с количеством исследуемых образцов
антибиотиков и накладывают на засеянные тест-микробом чашки. Следует
отметить, что каким-либо одним из приведенных методов нельзя
идентифицировать антибиотик. Только сочетание разнообразных методов
хроматографии с электрофорезом на бумаге, адсорбционным и спектральным
анализом в области И К и других лучей может привести к положительному
результату.
IX.5.3. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПО УСТОЙЧИВЫМ ФОРМАМ
МИКРООРГАНИЗМОВ
Метод основан на способности микроорганизмов вырабатывать устойчивость к
одним антибиотикам, сохраняя чувствительность к антибиотикам другой
химической природы. Этим методом можно установить, имеет ли изучаемый
антибиотик сходство с каким-либо из известных препаратов. Для
идентификации антибиотиков следует использовать устойчивые формы
микроорганизмов и соблюдать определенные условия: 1) учитывать, насколько
специфична устойчивость микробов к антибиотику, под воздействием которого
они получены; 2) помнить, что в некоторых случаях перекрестная
устойчивость связана со сходством механизма действия антибиотиков на
бактерии, а не с идентичностью сравниваемых антибиотиков; 3) нельзя
использовать для целей идентификации антибиотиков формы тест-
микроорганизмов, которые обладают неспецифической или малоспецифической
устойчивостью.
Изучение действия вновь выделенных антибиотиков на устойчивые и
чувствительные формы микробов может помочь не только при отборе новых
антибиотиков, но и при контроле промежуточных продуктов в процессе
химической очистки антибиотиков [146, 147].
IX.5.4. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПО КАЧЕСТВЕННЫМ
ХИМИЧЕСКИМ РЕАКЦИЯМ
Характерные химические реакции, используемые для ранней идентификации
антибиотиков (на стадии культуральных жидкостей или полуочищсшных
концентратов), образуемых пенициллиями и аспергиллами, приведены в
придржении 6.
278
IX.6. ОСНОВНЫЕ ПРИЕМЫ ВЫДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКОВ
Антибиотики, образуемые грибами, могут накапливаться как в культуральной
жидкости (пенициллины), так и в мицелии (гризео-фульвин) продуцента.
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed