Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 125

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 119 120 121 122 123 124 < 125 > 126 127 128 129 130 131 .. 279 >> Следующая

кислоты. Смесь хранят при 2° С. Перед использованием разбавляют 9
объемами ледяной уксусной кислоты. К гидролизованной пробе (0,5 мл)
добавляют 0,1 мл реактива А, нагревают на водяной бане ровно 3 мин,
охлаждают и вносят 3 мл раствора Б. Пробы тщательно перемешивают и
помещают в баню на 20 мин при 36-38° С. После инкубации пробы охлаждают и
измеряют оптическую плотность при 585 нм. Молярный коэффициент экстинкции
N- auci илглюкозамина составляет 18 • 103, N-ацетилгалактозамина - 7,4 •
103.
VII.4, ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ КАК МЕТОД ИЗУЧЕНИЯ НУКЛЕОТИДНОГО ФОНДА
[126]
Тонкослойная хроматография (ТСХ) в настоящее время является более
совершенным методом анализа производных НК и нуклеотид-коферментов. ТСХ
выгодно отличаются от бумажной хроматографии значительно более высокой
чувствительностью, большей скоростью и четкостью разделения. В настоящее
время исследователя не удовлетворяет многодневное, даже многочасовое
фракционирование смеси из неизвестных производных. ТСХ дает возможность
провести анализ за несколько часов.
Количество сорбентов, используемых в ТСХ нуклеотидов очень велико, но
наиболее широко применяемыми являются целлюлоза - ДЭАЭ и ПЭИ. ТСХ может
быть использована как в аналитическом, так и в препаративном вариантах. В
аналитическом варианте применяют слои сорбента толщиной 0,1-0,25 мм,
позволяющие разделить 3-10 оптических единиц (при 260 нм). В слое
толщиной 1-1,5 мм можно фракционировать до 100 оптических единиц. ТСХ
имеет и свои сложности, особенно при элюции нуклеотидов со слоя. Приемы
переноса вещества с сорбентом в пробирку для дальнейшей десорбции
достаточно трудоемки и не сравнимы с простым вырезанием участков бумажной
хроматограммы. В настоящее время этот вопрос в принципе решен благодаря
тому, что слои наносят не на стекло, а на листы из тонкого пластика, с
которым можно обращаться, как с бумагой.
VII.4.1. МИКРОТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Методы количественной оценки хроматограмм можно разделить на две
категории. В первом случае разделенные вещества элюируют из слоя для
дальнейшей оценки их количества. Во втором - разделенные вещества
анализируют прямо в слое. Исследование вещества в слое может быть
выполнено путем измерения площади и плотности пятна на проявленной
хроматограмме или ее фотокопии. Эти величины связывают с количеством
вещества в пятне, используя стандарты (свидетели) и калибровочные кривые.
Количество вещества в пятне
9*
259
определяют с помощью денситометра. Денситометрия включает сканирование
пятна на хроматограмме пучком света. Прошедший или отраженный свет
попадает на фотоумножитель. Разность интенсивности падающего и прошедшего
(или отраженного) света измеряется в виде электрического сигнала и
записывается на графике в виде пиков. Высота пика является мерой
интенсивности пятна, ширина - пропорциональна длине пятна.
Микротонкослойную хроматографию оснований и нуклеозидов, выделенных из
мицелия грибов, можно выполнять в слое, нанесенном на предметные стекла
размером 26 X 76 мм [20].
VIII. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОФЕРМЕНТНЫХ ВИТАМИНОВ У ГРИБОВ
VIII.1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Коферментные витамины, т. е. витамины, которые используются в клеточном
обмене как структурные элементы для синтеза кофермен-тов, представляют
собой наиболее четко ограниченную группу витаминов. К ним относятся
витамины группы В: никотиновая кислота, пиридоксин, биотин, тиамин,
рибофлавин, пантотеновая кислота, фолиевая кислота, липоевая кислота и
кобаламин (витамин В12) [465]. Микромицеты можно разделить по потребности
в витаминах на аук-сотрофные и гетеротрофные. Ауксотрофные синтезируют
все витамины или некоторые. Гетеротрофность может быть выражена в
потребности гриба в одном или нескольких витаминах.
Физиологический эффект витаминов определяется их превращением в
коферменты и ферменты в микробной клетке. Коферментные витамины участвуют
в ключевых реакциях окисления гексоз гексозомо-нофосфатного пути (ГМФ),
распространенного у грибов, в анаэробном гликолитическом пути расщепления
глюкозы, в цикле трикар-боновых кислот (ЦТК), в котором принимают участие
все витамины группы В, а также в синтезе вторичных метаболитов. Для
определения содержания витаминов применяют различные физико-химические и
микробиологические методы [128, 206, 302]. В ряде случаев
микробиологические методы оказались единственно возможными,
превосходящими другие как по чувствительности, так и по специфичности.
Способность микромицетов к образованию кобаламина можно определить
методом Л. С. Куцева [246], Н. Д. Иерусалимского и др. [181], а тиамина,
биотина, пиридоксина, никотиновой и пантотеновой кислот -
микробиологическим методом Одинцовой [335] и его модификациями [180, 209,
218, 231, 246, 303, 317, 365, 586]. Для определения некоторых витаминов
приемлемы химические методы. Так, например, рибофлавин определяют
флюорометрическим методом [360].
VIII.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИАМИНА, БИОТИНА, ПИРИДОКСИНА, НИКОТИНОВОЙ И
ПАНТОТЕНОВОЙ КИСЛОТ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
Предыдущая << 1 .. 119 120 121 122 123 124 < 125 > 126 127 128 129 130 131 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed