Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Бич Г. -> "Биотехнология. принципы и применение " -> 134

Биотехнология. принципы и применение - Бич Г.

Бич Г., Бест Д., Брайерли К., Кумбс Дж. Биотехнология. принципы и применение — М: Мир, 1988. — 480 c.
ISBN 5-03-000058-5
Скачать (прямая ссылка): biotehnologiyaprincipiiprimeneniya1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 210 >> Следующая

Гетерокарионы и'часто образующиеся
нестабильные диплоиды Cephalosporium acremonium
Г етерокарионы и редкие стабильные диплоиды Aspergillus Penicillum
Гетерокарионы и часто образующиеся
стабильные диплоиды
Candida tropica/is
Нестабильные диплоиды Yarrowia lipolytica
Стабильные диплоиды
Saccharomyces cerevisiae Ktuyveromyces lactis
Рис. 7.4. Результаты внутривидовых слияний протопластов.
щивания в неселективных условиях образуются споры с гаплоидными ядрами
лишь одного из двух родительских видов.
Предпринимались попытки осуществить слияние протопластов дрожжей разных
родов (например, CatididaxSaccharomy-copsis, YarrowiaxPichia,
YarrowiaXKtuyveromyces, Saccharo-mycesXSchizosaccharomyces). Однако такие
гибриды оказались нестабильными, а частота их образования очень низкой
(10-5-Ю-4). В последнем варианте обычно формировались многоядерные
клетки. Сообщалось об успешном слиянии протопластов мицелиальных грибов
(целлюлолитический организм
Генетика и биотехнология
311,
Trichoderma reesii) и дрожжей (5. cerevisiae), но эти наблюдения
нуждаются в подтверждении.
При многих слияниях образуются нестабильные гетерока-рионы, в которых
обычно доминирует ядро одной из родительских форм. Впрочем, далеко не
всегда это препятствует генетическому обмену. Так, убедительно показана
возможность межъядерных генетических обменов в гетерокарионах Schizop-
hilurn commune к Saccharomyces cerevisiae. Таким образом, слияние
протопластов может быть полезным методом установления
гетерокариотического состояния, при котором возможен в ограниченном
объеме перенос генов.
Образование гибридов растений путем слияния протопластов
Протопласты растений можно получить путем механического или
ферментативного разрушения клеточных стенок. Такие протопласты- ценный
инструмент в: руках генетика растений. Они довольно быстро и эффективно
регенерируют' Клеточную стенку, у них легко индуцировать деление с
образованием каллус-ной ткани. Из каллуса можно вырастить растения,
способные цвести и давать всхожие семена. Доступность жизнеспособных
протопластов позволила генетикам растений проводить опыты по мутагенезу и
селекции на уровне единичной клетки, т. е. примерно так, как это делают
микробиологи. В результате, например, были получены растения табака,
устойчивые к болезни "wild-fire": мутации у протопластов вызывали
этилметансуль-фонатом, а затем отбирали мутанты, устойчивые к действию
метионинсульфоксима. Дело в том, что токсин, образуемый Pseudomonas
tabaci (организмом, вызывающим упомянутое заболевание), - это тоже аналог
метионина.
Слияние протопластов растений осуществляют с помощью ряда агентов,
включая азотнокислый натрий, гидроксид кальция и ПЭГ. Наибольшая частота
слияния наблюдается при действии ПЭГ, но гибриды, полученные в
присутствии кальция, проще регенерировать в целое растение. Таким путем
удалось получить межсортовые внутривидовые гибриды, гибриды между видами
одного рода и даже разных родов. Опыты эти проводились на таких важных
культурах, как картофель, табак и спаржа.
Результатом слияния моЖет быть простое сращение клеток одной и той же
родительской линии или образование гибридов двух типов клеток. Как и для
большинства других разновидностей скрещивания, основная трудность здесь
состоит в выборе метода отбора гибридов; кроме того, работа с растениями
сильно осложняется недостатком подходящих генетических маркеров. В
большинстве тех случаев, когда гибриды удавалось по-
312
Глава 7
лучить путем слияния протопластов, гибридизация уже была осуществлена
обычными генетическими методами. Таким образом, фенотип гибрида был уже
известен, и его можно было принять за стандарт при отборе. В этой новой
области селекции растений предстоит еще большая работа, и успех ее
определяется тем, сможем ли мы использовать обширный набор* маркеров
(например, устойчивости к химическим веществам иг токсинам) или
ауксотрофных мутантов растений.
7.3.3. Слияние клеток животных
Осуществить слияние клеток и получить внутри- или межвидовые гибриды
клеток млекопитающих методически проще, чем в случае микроорганизмов или
растений, так как клетки млекопитающих не имеют клеточной стенки, которую
необходимо удалять перед слиянием. Первый метод контролируемого слияния
клеток млекопитающих был основан на использовании инактивированного
вируса Сендай. Этот вирус относится к группе парамиксовирусов; его вирион
покрыт липидсодержащей оболочкой, сливающейся с мембраной клетки-хозяина
и обеспечивающей проникновение вируса в клетку. Вирус способствует
слиянию, связываясь одновременно с мембранами двух клеток. В опытах по
слиянию клеток млекопитающих используются также некоторые химические
вещества (ионы кальция, лизоле-цитин, ПЭГ).
Отбор гибридов из смеси продуктов слияния лучше всего-вести в селективных
условиях, хотя для этого можно использовать и трудоемкий метод скрининга.
Так, отбор может происходить в результате комплементации ауксотрофных и
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 210 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed