Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Баранов В.С. -> "Внешняя среда и развивающийся организм " -> 135

Внешняя среда и развивающийся организм - Баранов В.С.

Баранов В.С., Божкова В.П., Граевский Э.Я., Гулидов М.В. Внешняя среда и развивающийся организм — М.: Наука , 1977. — 385 c.
Скачать (прямая ссылка): vneshnyayasredairazvorganizm1977.djvu
Предыдущая << 1 .. 129 130 131 132 133 134 < 135 > 136 137 138 139 140 141 .. 226 >> Следующая

1075
Rano pipiens
стадпн 7 < \ 1 деление} 70 100 --- --- --- --- --- --- KoetoHOw, Mor
стадия 9 4f> 98 --- rill, IMS
Paracentrotus livulus 25 245 •47! •14 28 --- --- --- Hothsohllri, няг-
ПМ. 1958
I.ylwhimis pictus 200 St.Mnhirdt Pt al.,
!97l
VI.3.3. Физиологические раствори
дли культивирования целых зародышей, эксплантатов и изолированных клеток
Экспериментальная работа с эксплантатами тканей зародышей и изолированными клетками выдвигает задачу приготовления искусственных растворов, которые; могли бы заменить их естественную среду. Даже для культивирования целых зародышей пресноводных животных (рыб. амфибий и др.) иногда оказывается необходимым использован, не их естественную среду — воду, а соленые растворы: например, при инкубации оперированных зародышей, когда вода может их сильно повреждать. Известно, что интактные зародыши амфибий с ранних стадий могут развиваться в солевых растворах, осмотичпость которых пе превышает половины осмотнчпоста раствора Рин гора (Morrill et al.. ifi66; Woodward, 10(58; Slack el, al., 1973). При более высокой осмотнч ноет и в период дробления блокируется образование борозд (Woodward, 19(58). Поэтому для экспериментальной работы используются либо сильно разведенный раствор Рнпгера (или слабый раствор NaGl), либо специальные растворы; раствор Гольтфретера (HoUfreLer, 19-13), основу которого составляет (К) мМ NaGl, и его модификации — растворы Ниу-Твитти и Стейнберга. Варьирование рТ1 растворов в широких пределах (от 7 до 9,5) не сказывается иа гаструляции и органогенезе (Stablelm-d, 1949). Возможность некоторого варьирования концентраций основных ионов при культивировании зародышей пресноводных животных объясняется, видимо, наличием у них приспособлений к жизни в пресной воде в виде пониженной проницаемости поверхностного слоя для поды и солей (см. раздел VI.5).
Ранние зародыши рыб, как п амфибий, повреждаются в растворах, нзотовичиых раствору Рипгера, и в некоторых случаях сказывается не только осмотическая сила, но и ионный состав среды (Божкова и пр., 1972). Так. зародыши вьюна ранних стадий развития (4 128 бластоме-
ров) прп инкубации в растворе Гольтфретера двойной концентрации разрыхляются, теряют нормальную форму, не гаструлируют. В разрыхлении зародышей, т. е. в ослаблении связи между бластомерами, «виноваты» ионы Ка. так как повреждения структуры бластодиска не происходит, если вместо раствора Гольтфретера двойной концентрации берется раствор с обратным соотношением Na4" и К+ или с. половинной концентрацией Na4", но прп постоянной осмотичностп. Разрыхление зародышей вьюна в большой степени зависит от присутствия яйцевой оболочки, после ее снятия разрыхленные зародыши в том же растворе становятся нормальными по форме п гаструлируют.
Для изоляции и культивирования зачатков органов и тканей пресноводных зародышей используют растворы, почти вдвое отличающиеся от плазмы крови но осмотической силе и концентрациям основных ионов (табл. 10). Самыми распространенными являются растворы Гольтфретера. растворы Ниу-Твитти и Стейнберга. Последние отличаются от раствора Гольтфретера присутствием попов и буферными системами. Эти
же растворы используются для культивирования изолированных, клеток (Cnrl.ia, 1957; Barth L. G, Barth L. J, 1959; Jones, ELsriale, I9f>3). Однако из последних работ Слэк и соавторов (Slack et al., 1973; Slack, Warner, 1973) видно, что хмежклеточпая среда в ранних зародышах амфибий имеет более высокую концентрацию натриевой соли (см. раздел
VI.3.2), чем обычно используемые растворы. Авторы предполагают, что более подходящим в качестве инкубационной среды для изолированных клеток этих зародышей ранних стадий, а возможно. и других стадий является раствор, близкий к раствору Рннгера (100 мМ Na). В пользу этого же предположения говорят опыты по микроперфузии бластоиеля растворами разного состава (Shapiro. 1958), из которых следует, что га-отруляция идет наиболее успешно в перфу ватах лысо кон солености (в 1,5 или 2 раза более высокой, чем в растворе Гольтфретера), а также при больших значениях pH, равных 8—9.
Итак, целые зародыши пресноводных жнвотпых. например амфибий, могут развиваться даже в дистиллированной подо (Barth. Barth, 1074), а суспензии их клеток требуют растворов определенного ионного состава. Отсюда с несомненностью следует, что при инкубации эксплантатов чз тканей зародышей требования к растворам будут зависеть от того, насколько эксплантаты могут полно имитировать структуру целого зародыша. В опытах Барта и Барт (Barth, Barth, 1974) показана зависимость способности к дифферснцировке эксплантатов разной величины от выбора раствора. Оказалось, что крупные эксплантаты (из дорзальной и латеральных губ бластопора ) могут нормально развиваться и образовывать структуры головы в среде, содержащей всего 17 мМ NaCl. Те же эксплантаты, порезанные иа 8 частей, способны давать нервные, пигментные и мьтщечпые клетки, только если паходятся в среде, содержащей не менее 44 мМ NaCl. Совсем маленькие группы клеток (по 125 штук) дифференцируются в растворе, содержащем 77—88 мМ NaCl. Из приведенных данных следует, что эксплантаты тканей зародыша представляют собой сложные структуры, способные полностью или частично создавать, как и нелме зародыши, внутреннюю среду и потому различаются по требованиям к инкубационным растворам.
Предыдущая << 1 .. 129 130 131 132 133 134 < 135 > 136 137 138 139 140 141 .. 226 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed